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Watson e Crick
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A=T C=G
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Desnaturação de DNA % desnaturação T’m Temperatura oC
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Ligação cooperativa quando rompida o efeito é marcante.
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Desnaturação de DNA % desnaturação T’m Temperatura oC
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Desnaturação em função do conteúdo de GC
%CG T’m
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Separando as fitas! Aumento de Temperatura ou de pH resulta em
desnaturação
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Reassociando Temperatura e força iônica
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Reassociação
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Reassociação depende da concentração das seqüências
Cot
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A velocidade de reassociação depende da complexidade do DNA
Cot
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Três classes de seqüências de DNA
% reassociação Cot
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O segredo da Vida...
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Como copia...
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Replicação de DNA
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Ligação fosfodiester A reação de polimerização é feita pela DNA polimerase e necessita de nucleotídeos trifosfatos, uma extremidade “primer” ou iniciadora, que possui a hidroxila 3’ livre e um molde ou “template” para ser copiado.
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A=T C=G ¿G=T? ¿C=A?
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DNA polimerase I tem função editorial
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“Bolha” de replicação
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Como as seqüências são reconhecidas?
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Domínio: Dedo de Zinco
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Domínio: Hélice-Volta-Hélice
homodímeros podem reconhecer a seqüência Seqüências simétricas!
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Replicação unidirecional gera fragmentos: Fragmentos de Okazaki
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Replicação depende de diferentes atividades enzimáticas!
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Maquinaria de Replicação é um complexo multienzimático!
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Topoisomerases são realmente necessárias?
Tipo I Tipo II
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Qual a velocidade de replicação?
Em bactérias : 2000 bases/segundo Em eucariotos: 50 bases/segundo
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Como fica o final do Cromossomo?
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Empacotamento do DNA
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Organização da cromatina
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Seqüenciamento de DNA Princípios
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Reação com ddNTP
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Produtos da reação
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Leitura da seqüência
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