Diagnostic Techniques in bloodstream infections: where are we going?

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1 Diagnostic Techniques in bloodstream infections: where are we going?
Elizandra Silva Guimarães Aprimoramento USP 2010

2 BLOODSTREAM INFECTIONS
Bacteremia: presença da bactéria na corrente sanguínea Mortalidade BSI nosocomiais: de 35 para 60%. Em UTIs: de 31,5 para 82,4%, nos USA, em 2009. No Brasil: segundo MS (2009), infecções nosocomiais 15,5%.

3 IDENTIFICAÇÃO 4 diferentes categorias: Hybridization-based PCR-based
Microarray methods Protein-based

4 FLUORESCENCE IN SITU HYBRIDIZATION (FISH)
Técnica complementar à hemocultura convencional Acelera o diagnóstico de pacientes em sepse Altamente sensível e específica para bactérias G+

5

6 FISH

7 PCR-BASED METHODS Reduz o tempo do diagnóstico
Possui boa reprodutibilidade PCR Multiplex: necessita de uma suspeita diagnóstica Risco de contaminação Impossibilidade do método de acompanhamento terapêutico

8 SeptiFast “SeptiFast detects and identifies the presence of the 25 most common microorganisms in healthcare associated sepsis directly in 1.5 mL of blood, without prior incubation, in < 6 hours.” Multiplex real time PCR quantitativa e hibridização. Genotipagem Possibilidade de calcular a quantidade de bactérias presentes na amostra. Baixa sensibilidade em pequenas concentrações bacterianas Baixa especificidade para alguns microorganismos

9 SeptiFast

10 MICROARRAY METHODS Probes de DNA para genes específicos ligados a substratos sólidos (vidro, nylon) para detecção e quantificação de ácidos nucléicos provenientes de amostras biológicas, as quais são postas para hibridar com o DNA fixado no array. Detecção, indentificação e genotipagem. Importante ferramenta epidemiológica. Pequena quantidade de amostra Relativa baixa sensibilidade de microarrays de fluorescência.

11 MICROARRAY biotech.biology.arizona.edu/.../microaray.jpg

12 PROTEIN-BASED METHODS
Baseado em espectroscopia vibracional, na qual se utiliza radiação eletromagnética para testar o comportamento vibracional de proteínas observando-se a absorção ou espalhamento dessa radiação. Método complementar

13 PERSPECTIVAS Maior rapidez Diminuição de custos
Utilização de técnicas conjuntas Aumento da sensibilidade e especificidade dos métodos Importância epidemiológica