DOSAGEM C-Hb e M-Hb.

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1 DOSAGEM C-Hb e M-Hb

2 CO-OXIMETRO Princípio do método: Amostras de sangue total são quimicamente hemolisadas por íntimo contato com agente surfactante não iônico. O sangue hemolisado é então analisado espectrofotometricamente , através de um fluxo em cubeta termostática. O sangue total é aspirado pelo instrumento, misturado com diluente, hemolisado, e mantido em temperatura constante na cubeta. A absorbância é gerada através de medida de luz monocromática em seis comprimentos de onda específicos (isolados no range de 530 a 670nm) que passa através da cubeta captada por um foto-detector.

3 O microcomputador mede Hemoglobina Total (tHb), percentual de Oxihemoglobina (%O2Hb), percentual de Carboxihemoglobina (%COHb), percentual de Metahemoglobina (%MetHb) e percentual de Deoxyhemoglobina (%HHb). Absorbâncias: Medida do branco – obtida com seis leituras de absorbância da solução zero (zeroing solution); Medida da amostra – amostra diluída e hemolisada (sangue, controle ou calibrador) obtida com seis leituras de absorbância;

4 Cálculo da absorbância – As seis absorbâncias do branco são subtraídas das seis absorbâncias obtidas para a amostra: A(NET) = A(SAMPLE) – A(BLANK) Onde A = abs obtida em cada comprimento de onda Cálculo da concentração: È calculado através da concentração fracional de várias hemoglobinas presentes na amostra: A = K1C1+2C2+3C C C = concentração de diferentes espécies de Hb K = escala constante utilizada para calibração do processo tHb  = coeficiente da matrix A = Valor de absorbância no sangue nos diferentes comprimentos de onda

5 Concentrações são utilizadas para determinar tHb e percentual relativo de espécies de Hb.
O valor de concentração da hemoglobina total (g/dL) é a soma das quatro concentrações: CtHb = C(HHb)+C(O2Hb)+C(COHb)+C(MetHb) Parâmetros de medida ( como todos os parâmetros são calculados): Concentração de Hemoglobina Total: A concentração de hemoglobina total é a soma da concentração das espécies de hemoglobina HHb, O2Hb, COHb e MetHb. Valor de referência para adultos: 12.0 a 18.0g/dL THb = (HHb+O2Hb+COHb+MetHb) x K

6 Porcentagem de Oxihemoglobina (%O2Hb)
Valor de referência para sangue arterial: 94.0 a 97.0% %O2Hb = O2Hb X 100 HHb+O2Hb+COHb+MetHb Porcentagem de Carboxihemoglobina (%COHb) %COHb = COHb X 100

7 Porcentagem de Deoxyhemoglobina %HHb):
%HHb = HHb X 100 HHb+O2Hb+COHb+MetHb

8 Detecção/correção de interferentes:
Detecção de sulfahemoglobina: Devido a características espectrais do comprimento de onda utilizado no IL 682, a SHb pode interferir em medidas de outras hemoglobinas. A presença de sulfahemoglobina causa um aparente acréscimo de MetHb e um resultado negativo de carboxihemoglobina. EQUIPAMENTO SINALIZA ALERTA: SulfHb Warning – Sulfahemoglobina detectada superior a 1,5% ERRO não liberar resultado. High SulfHb Warning – equipamento não libera resultado.

9 Correção de turbidimetria:
Presença de lípides pode interferir na medida de absorbância e afetar os resultados do Co-oxímetro. Existe um sistema de correção automático. Para valores de triglicérides de aproximadamente 1500mg/dL (acima de 3%) é liberado para o operador uma mensagem de alta turbidimatria . EQUIPAMENTO SINALIZA ALERTA: High turbidity – não liberar resultado.

10 Limitações: Range Resolução Inexatidão * Imprecisão** tHb 5-20g/dL 0,1g/dL + 0,3g/dL 0,2g/dL O2Hb 0-100% 0,1% +1% 0,5% COHb 0-100% 0,1% +1% 0,5% HHb 0-100% 0,1% +3% 1,5% MetHb 0-10% 0,1% +1% 0,5% MetHb % 0,1% +10%relative 1,5%

11 Exatidão definida como 95% dos limites de confiança para amostras com MetHb de 0 – 10% e hemolisadas no PH 7.0 a 7.4; Precisão de um desvio padrão. Interferências: Sulfahemoglobina: Presença de SHb pode causar um aparente aumento de metahemoglobina e um decréscimo de carboxihemoglobina e Oxyhemoglobina Bilirrubina: pode causar um decréscimo de 1,5% de Oxyhemoglobina e pode ter um acréscimo de 1 a 2% de carboxihemoglobina em um nível de bilirrubina de 30mg/dL. Turbidimetria: acima de 3% interfere nos resultados Indocyanine green (marcador de fluorescência): alterações de resultados do equipamento

12 Azul de metileno: acréscimo de metahemoglobina e diminuição de oxyhemoglobina
Algumas drogas e substâncias que podem alterar hemoglobina a metahemoglobina causando metahemoglobinemia. Sulfahemoglobina podem ser formadas com o uso de certas drogas, causando interferência.

13 Especificações do equipamento:
Amostra sangue total Anticoagulante EDTA ou heparina Quantidade de amostra 65L Fluxo de reagentes Ciclo: Zero Diluent Cleaning Sample mL mL NA Prime mL mL mL Clean mL mL mL Zero ref. 0.6mL mL NA Tempo do ciclo de amostra 58 segundos  monitorados 535.0nm, 585.2mn, 594.5mn, 626.6mn, 638.3mn, 667.8nm Temperatura ambiente 15-32º C Humidade ambiente  90%