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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica IX Semana de Biologia da UFPB Laboratório de Genética de Microrganismos - DBM.

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1 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica IX Semana de Biologia da UFPB Laboratório de Genética de Microrganismos - DBM Biossegurança e Rotina Laboratorial

2 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Técnicas Microbiológicas Biossegurança

3 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Biossegurança Conjunto de procedimentos, ações, técnicas, metodologias, equipamentos e dispositivos capazes de eliminar ou minimizar riscos inerentes às atividades de pesquisa, produção, desenvolvimento, tecnológico, ensino e prestação de serviços, que podem comprometer a saúde do homem, dos animais, do meio ambiente ou a qualidade dos trabalhos desenvolvidos.

4 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Histórico Conclusão: A manipulação de culturas, espécies ou inalação de poeira contendo a bactéria Brucella é eminentemente perigosa para os trabalhadores de um laboratório – Meyer e Eddie – 74 casos de brucelose associados a laboratórios

5 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica 222 infecções, sendo 21 fatais – 12% por acidentes relatados 1949 – Sulkin e Pike – Pesquisa sobre infecções associadas a laboratórios Histórico 1342 casos de infecções, sendo 72% das infecções por brucelose, tuberculose, tifo e infecção estreptocócica Sulkin e Pike – Nova pesquisa

6 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Histórico

7 Histórico 1974 – Classificação de Risco dos Agentes Etiológicos 1980 – Precauções universais na manipulação de fluídos corpóreos 1984 – Primeiro Workshop Brasileiro de Biossegurança - Fiocruz 1995 – Lei Brasileira de Biossegurança – Lei 897/95

8 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica 1999 – Fundação da Associação Nacional de Biossegurança (ANBio) 1999 – Primeiro Congresso Brasileiro de Biossegurança 2000 – Biossegurança como discíplina científica universitária 2001 – Indução de ações em biossegurança pelo CNPq Histórico

9 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Tipos de Riscos Físicos Químicos Biológicos Acidentes e Ergonômicos

10 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Tipos de Riscos Físicos Químicos Biológicos Acidentes e Ergonômicos - -Provocados por algum tipo de energia; - - A caracterização depende do equipamento; - - Principais: * Equipamentos que geram calor ou chamas; * Equipamentos de baixa temperatura; * Material radioativo

11 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Tipos de Riscos - -Conhecimento das substâncias químicas; - - Cuidados adequados para o manuseio. Físicos Químicos Biológicos Acidentes e Ergonômicos

12 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Tipos de Riscos - - Decorrentes da exposição à produtos de animais, vegetais e microrganismos; - Agentes microbiológicos: * Grau de patogenicidade * Poder de invasão * Resistência a esterilização * Virulência * Capacidade mutagênica - Vias de contaminação. Físicos Químicos Biológicos Acidentes e Ergonômicos

13 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Tipos de Riscos - - Fatores que gerem situações de risco para a integridade física e moral; - - Fatores que possam interferir nas características psicofisiológicas. Físicos Químicos Biológicos Acidentes e Ergonômicos

14 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Classificação dos Microorganismos Classe 2: Risco individual moderado e baixo risco para a comunidade. Nível de Segurança 2

15 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Uso de Barreiras Equipamentos de Proteção Individual (EPI): Proteção contra o contato com agentes infecciosos, tóxicos ou corrosivos, calor excessivo, fogo dentre outros.

16 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica

17 Uso de Barreiras Equipamentos de Proteção Coletiva: Proteção dos pesquisadores, do ambiente e da pesquisa desenvolvida.

18 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Biossegurança Manuseio de produtos biológicos envolve: Limpeza Desinfecção Esterilização Descontaminação Anti-sepsia Assepsia

19 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilização Calor Radiação Filtração Processos Físicos:

20 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilização Calor Radiação Filtração - - Calor úmido (vapor sob pressão) – Autoclave, maior poder de penetração e redução do número de microrganismos. - Calor seco - Incineração, flambagem ar quente (estufa) Processos Físicos:

21 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilização AUTOCLAVE - Dispositivo selado que permite a entrada de vapor sob pressão.

22 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica ESTUFA - Calor seco Ação: desnaturação das proteínas microbiana Esterilização

23 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilização Calor Radiação Filtração - - Flambagem Esterilização de alças e agulhas. Processos Físicos:

24 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilização Calor Radiação Filtração - Radiação eletromagnética Exemplos: microondas radiação ultravioleta raios X raios γ elétrons Processos Físicos:

25 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Radiação ultravioleta – Capela de Fluxo Laminar Esterilização

26 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilização Calor Radiação Filtração - - Remoção dos microrganismos de líquidos e gases sensíveis ao calor: * Glicose * Antibióticos * Reagentes químicos Processos Físicos:

27 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilização Tipos de filtros: A) A)Filtro de profundidade B) B)Membrana filtrante C) C)Filtro de trilhas de nuleação A) B) C)

28 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilização Filtração:

29 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilização Filtro de trilhas de nucleação - microscopia eletrônica de varredura

30 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Esterilização Produtos Químicos – Desinfetantes e Esterilizantes

31 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Atividades no laboratório: Planejamento das tarefas Condições adequadas Material necessário Maior segurança Menor desperdício Biossegurança

32 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Técnicas Microbiológicas Rotina Laboratorial

33 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Cultivo e Manutenção Meios de Cultura: Mistura de nutrientes requeridos para a sobrevivência e crescimento dos microorganismos em um sistema artificial. Podem ser em caldo (líquido) ou ágar (sólido). Meios líquidos - úteis para a obtenção de grande biomassa de microrganismos

34 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Cultivo e Manutenção Meios quimicamente definidos: (Meios com finalidades especiais) Meios seletivos Meios diferenciais Meios de enriquecimento Meios para anaeróbios Meios para o cultivo de bactérias (Geral-BHI)

35 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Métodos de Cultivo Inoculação: Técnica de esgotamento por estrias Técnica da semeadura em superfície Inundação Diluição por extinção ) (Obtenção de cultura pura, originada à partir de uma única célula (UFC) – A suspensão original da amostra é diluída seriadamente e semeiam-se amostras de cada diluição)

36 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Medida do Crescimento Método Quantitativo: Avaliação do número de células - UFC/mL – Unidades Formadoras de Colônias por mL. ex.: Contagem celular microscópica ou eletrônica, contagem em placa ou através de membrana filtrante. Método Qualitativo:. Avaliação do peso celular ou estimativa de unidades de absorbância da massa de células em caldo ou suspensões (turbidez).

37 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Identificação dos Microorganismos Características Culturais Morfologia Colonial Características Morfológicas Coloração simples Coloração diferencial Coloração de Gram Microscopia Óptica Características Metabólicas Características Fisiológicas Características Antigênicas Características patogênicas Características genéticas

38 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Estocagem Conservação de Culturas Puras: Conservação por um curto período (dias a meses): Armazenagem à temperatura de refrigeradores (4°C a 10°C) - Repiques freqüentes Conservação por longos períodos: Nitrogênio líquido a -196°C Freezers a -70°C/ -120°C Liofilização – congelamento a seco - viabilidade das culturas por muitos anos - coleção de microrganismos como referência.

39 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Material: Tubos de Cultura e Placas de Petri

40 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Material Instrumentos para Transferência de Culturas

41 Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica Obrigada!!!!!


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