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Biossegurança e Rotina Laboratorial
IX Semana de Biologia da UFPB Biossegurança e Rotina Laboratorial Laboratório de Genética de Microrganismos - DBM
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Técnicas Microbiológicas
Biossegurança
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Biossegurança Conjunto de procedimentos, ações, técnicas, metodologias, equipamentos e dispositivos capazes de eliminar ou minimizar riscos inerentes às atividades de pesquisa, produção, desenvolvimento, tecnológico, ensino e prestação de serviços, que podem comprometer a saúde do homem, dos animais, do meio ambiente ou a qualidade dos trabalhos desenvolvidos.
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Histórico 1941 – Meyer e Eddie – 74 casos de brucelose associados a laboratórios Conclusão: “A manipulação de culturas, espécies ou inalação de poeira contendo a bactéria Brucella é eminentemente perigosa para os trabalhadores de um laboratório.”
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Histórico 1949 – Sulkin e Pike – Pesquisa sobre infecções associadas a laboratórios 222 infecções, sendo 21 fatais – 12% por acidentes relatados Sulkin e Pike – Nova pesquisa 1342 casos de infecções, sendo 72% das infecções por brucelose, tuberculose, tifo e infecção estreptocócica
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Histórico
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Histórico 1974 – Classificação de Risco dos Agentes Etiológicos
1980 – Precauções universais na manipulação de fluídos corpóreos 1984 – Primeiro Workshop Brasileiro de Biossegurança - Fiocruz 1995 – Lei Brasileira de Biossegurança – Lei 897/95
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Histórico 1999 – Fundação da Associação Nacional de Biossegurança (ANBio) 1999 – Primeiro Congresso Brasileiro de Biossegurança 2000 – Biossegurança como discíplina científica universitária 2001 – Indução de ações em biossegurança pelo CNPq
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Tipos de Riscos Físicos Químicos Biológicos Acidentes e Ergonômicos
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Tipos de Riscos Físicos Químicos Biológicos Acidentes e Ergonômicos
Provocados por algum tipo de energia; A caracterização depende do equipamento; Principais: * Equipamentos que geram calor ou chamas; * Equipamentos de baixa temperatura; * Material radioativo
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Tipos de Riscos Físicos Químicos Biológicos Acidentes e Ergonômicos
Conhecimento das substâncias químicas; Cuidados adequados para o manuseio.
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Tipos de Riscos Físicos Químicos Biológicos Acidentes e Ergonômicos
Decorrentes da exposição à produtos de animais, vegetais e microrganismos; - Agentes microbiológicos: * Grau de patogenicidade * Poder de invasão * Resistência a esterilização * Virulência * Capacidade mutagênica - Vias de contaminação.
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Tipos de Riscos Físicos
Químicos Biológicos Acidentes e Ergonômicos Fatores que gerem situações de risco para a integridade física e moral; Fatores que possam interferir nas características psicofisiológicas.
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Classificação dos Microorganismos
Classe 2: Risco individual moderado e baixo risco para a comunidade. Nível de Segurança 2
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Uso de Barreiras Equipamentos de Proteção Individual (EPI):
Proteção contra o contato com agentes infecciosos, tóxicos ou corrosivos, calor excessivo, fogo dentre outros.
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Uso de Barreiras Equipamentos de Proteção Coletiva:
Proteção dos pesquisadores, do ambiente e da pesquisa desenvolvida.
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Biossegurança Manuseio de produtos biológicos envolve: Limpeza
Desinfecção Esterilização Descontaminação Anti-sepsia Assepsia
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Esterilização Processos Físicos: Calor Radiação Filtração
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Esterilização Processos Físicos: Calor Radiação Filtração
Calor úmido (vapor sob pressão) – Autoclave, maior poder de penetração e redução do número de microrganismos. - Calor seco - Incineração, flambagem ar quente (estufa) Calor Radiação Filtração
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Esterilização AUTOCLAVE - Dispositivo selado que permite a entrada de vapor sob pressão.
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Esterilização ESTUFA - Calor seco
Ação: desnaturação das proteínas microbiana
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Esterilização Processos Físicos: Calor Radiação Filtração Flambagem
Esterilização de alças e agulhas. Calor Radiação Filtração
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Esterilização Processos Físicos: Calor Radiação Filtração
- Radiação eletromagnética Exemplos: • microondas • radiação ultravioleta • raios X • raios γ • elétrons Calor Radiação Filtração
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Esterilização Radiação ultravioleta – Capela de Fluxo Laminar
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Esterilização Processos Físicos: Calor Radiação Filtração
Remoção dos microrganismos de líquidos e gases sensíveis ao calor: * Glicose * Antibióticos * Reagentes químicos
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Esterilização Tipos de filtros: A) B) C) Filtro de profundidade
Membrana filtrante Filtro de trilhas de nuleação
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Esterilização Filtração:
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Esterilização Filtro de trilhas de nucleação - microscopia eletrônica de varredura
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Esterilização Produtos Químicos – Desinfetantes e Esterilizantes
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Atividades no laboratório:
Biossegurança Atividades no laboratório: Planejamento das tarefas Condições adequadas Material necessário Maior segurança Menor desperdício
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Técnicas Microbiológicas
Rotina Laboratorial
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Cultivo e Manutenção Meios de Cultura:
Mistura de nutrientes requeridos para a sobrevivência e crescimento dos microorganismos em um sistema artificial. Podem ser em caldo (líquido) ou ágar (sólido). Meios líquidos - úteis para a obtenção de grande biomassa de microrganismos
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Cultivo e Manutenção Meios quimicamente definidos: Meios seletivos
(Meios com finalidades especiais) Meios seletivos Meios diferenciais Meios de enriquecimento Meios para anaeróbios Meios para o cultivo de bactérias (Geral-BHI)
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Métodos de Cultivo Inoculação: Técnica de esgotamento por estrias
Técnica da semeadura em superfície Inundação Diluição por extinção (Obtenção de cultura pura, originada à partir de uma única célula (UFC) – A suspensão original da amostra é diluída seriadamente e semeiam-se amostras de cada diluição)
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Medida do Crescimento Método Quantitativo:
Avaliação do número de células - UFC/mL – Unidades Formadoras de Colônias por mL ex.: Contagem celular microscópica ou eletrônica, contagem em placa ou através de membrana filtrante. Método Qualitativo: Avaliação do peso celular ou estimativa de unidades de absorbância da massa de células em caldo ou suspensões (turbidez).
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Identificação dos Microorganismos
Características Culturais Morfologia Colonial Características Morfológicas Coloração simples Coloração diferencial Coloração de Gram Microscopia Óptica Características Metabólicas Características Fisiológicas Características Antigênicas Características patogênicas Características genéticas
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Estocagem Conservação de Culturas Puras:
Conservação por um curto período (dias a meses): Armazenagem à temperatura de refrigeradores (4°C a 10°C) - Repiques freqüentes Conservação por longos períodos: Nitrogênio líquido a -196°C Freezers a -70°C/ -120°C Liofilização – congelamento a seco - viabilidade das culturas por muitos anos - coleção de microrganismos como referência.
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Material: Tubos de Cultura e Placas de Petri
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Material Instrumentos para Transferência de Culturas
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Obrigada!!!!!
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