A apresentação está carregando. Por favor, espere

A apresentação está carregando. Por favor, espere

Biologia Molecular Básica e Aplicada Primeira Oficina de Trabalho das Redes Nacionais de Laboratórios Dra. Maria Inês de Moura Campos Pardini Pesquisadora.

Apresentações semelhantes


Apresentação em tema: "Biologia Molecular Básica e Aplicada Primeira Oficina de Trabalho das Redes Nacionais de Laboratórios Dra. Maria Inês de Moura Campos Pardini Pesquisadora."— Transcrição da apresentação:

1 Biologia Molecular Básica e Aplicada Primeira Oficina de Trabalho das Redes Nacionais de Laboratórios Dra. Maria Inês de Moura Campos Pardini Pesquisadora do Depto. de Clínica Médica da FMB Responsável pelo Lab. de Biologia Molecular do Hemocentro-Botucatu Biologia Molecular Básica e Aplicada Primeira Oficina de Trabalho das Redes Nacionais de Laboratórios Dra. Maria Inês de Moura Campos Pardini Pesquisadora do Depto. de Clínica Médica da FMB Responsável pelo Lab. de Biologia Molecular do Hemocentro-Botucatu

2 Dogma Central da Biologia Molecular DNA RNA Proteína

3

4 RECEPTORES DE CITOCINAS

5

6

7

8 Duas cadeia antiparalelas, dispostas em dupla hélice.

9 FOSFATO - O P O CH 2 O O-O- C1´ C2´ C3´ C4´ O OH H N N ONH 2 AÇÚCAR BASE NITROGENADA NUCLEOTÍDEO

10

11

12

13 Adenina (A) Timina (T) Guanina (G) Citosina (C) A - T C - G Bases Nitrogenadas

14

15 Duplicação do DNA

16

17 - - C1 ´ C2 ´ C3 ´ C4 ´ O OH H - - C1 ´ C2 ´ C3 ´ C4 ´ O OH H - - C1 ´ C2 ´ C3 ´ C4 ´ O OH H

18

19

20

21 DNA genômico Taq polimerase Primers Tampão dCTP dATP dGTP dTTP 94ºC 5 min 72ºC 30 s 57ºC 30 s

22

23

24 PREPARO DAS AMOSTRAS TRANSCRIÇÃO REVERSA REVERSA PCR PROPRIAMENTE DITO (mimetiza a duplicação) DETECÇÃO

25 Transcrição (DNA-RNA) (Expressão do gene)

26

27 TATA box: -25 a -30 bp acima do início do sítio de transcrição. TFIID: fator de transcrição geral que liga-se ao TATA box. Contém 2 tipos de sub-unidades TATA binding protein (TBP): liga-se ao TATA box e a TAFs. TBP-associated factors (TAFs): proteínas que ligam-se ao TBP. TFIIB: liga o complexo TFIID à RNA polymerase. TFIIF: liga a RNA polymerase ao TFIID. TFIIE and TFIIH: liga-se ao complexo enzimático e inicia a transcrição. Seqüência iniciadora (Inr): está presente em alguns genes e ajuda no alinhamento do complexo. A Inr liga-se aos TAFs.

28 Domínios dos fatores de transcrição Domínio de ligação ao DNA: ancora o FT ao sítio correto no promotor ou no enhancer. Domínio de ativação: estimula a transcrição por interação com outros FTs como os TAFs.

29 Os hormônios esteróides difundem-se pela membrana e ligam- se a receptores citoplasmáticos que estimula a transcrição de genes alvo

30 A ligação do hormônio ao receptor promove a interação desse receptor a uma proteína G. A sub- unidade alfa da proteína G estimula a adenil ciclase, que cataliza ATP AMP cíclico O cAMP liga-se à proteína quinase A que, no núcleo, fosforila o fator de transcrição CREB (CRE-binding protein). CRE = elemento respondedor de cAMP

31 TRANSCRIÇÃO

32

33

34

35

36

37

38 Ciclo de vida de um mRNA

39 TRANSCRIÇÃO

40 RNA cDNA DNA cDNA TR RNASE H TR TRANSCRIÇÃO REVERSA

41 LIBERAÇÃO DO ÁCIDO NUCLEICO ISOLAMENTO AMPLIFICAÇÃO (mimetiza a transcrição) DETECÇÃO

42 NASBA NUCLEIC ACID SEQUENCE BASED AMPLIFICATION DETECÇÃO DO ÁCIDO NUCLEICO LIBERAÇÃO DO ÁCIDO NUCLEICO ISOLAMENTO DO ÁCIDO NUCLEICO AMPLIFICAÇÃO DO ÁCIDO NUCLEICO

43 LIBERAÇÃO DO ÁCIDO NUCLEICO 1 ML DE PLASMA TAMPÃO DE LISE ISOLAMENTO DO ÁCIDO NUCLEICO

44 SÍLICA CALIBRADORES Qa, Qb, Qc ISOLAMENTO DO ÁCIDO NUCLEICO ELUIÇÃO DO RNA LAVAGENS

45 PRIMER RNA ELUÍDO AMPLIFICAÇÃO DO ÁCIDO NUCLEICO ENZIMAS 41 0 C

46 41 0 C 41 0 C ISOTÉRMIC0ISOTÉRMIC0 ISOTÉRMIC0ISOTÉRMIC0

47 ELETROQUIMIOLUMINESCÊNCIA LUZ EMITIDA PELAS SONDAS QUANTIDADE DE AMOSTRA AMPLIFICADA

48 LEITURA

49

50 Tradução RNA-Proteína

51

52

53

54

55

56

57

58

59

60

61

62

63

64

65

66

67 PREPARAÇÃO DAS AMOSTRAS HIBRIDIZAÇÃO DAS SONDAS E DAS MOLÉCULAS AMPLIFICADORAS DO SINAL DETECÇÃO Ministério da Saúde, 1998

68

69

70

71

72 TRÊS METODOLOGIAS COMERCIAIS DISPONÍVEIS NASBA BRANCHED-DNA RT-PCR Mini

73

74

75

76


Carregar ppt "Biologia Molecular Básica e Aplicada Primeira Oficina de Trabalho das Redes Nacionais de Laboratórios Dra. Maria Inês de Moura Campos Pardini Pesquisadora."

Apresentações semelhantes


Anúncios Google