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Citometria de fluxo Com material obtido em parte da: Purdue University Cytometry Laboratories (http://www.cyto.purdue.edu/flowcyt/educate/pptslide.htm)http://www.cyto.purdue.edu/flowcyt/educate/pptslide.htm.

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1 Citometria de fluxo Com material obtido em parte da: Purdue University Cytometry Laboratories (http://www.cyto.purdue.edu/flowcyt/educate/pptslide.htm)http://www.cyto.purdue.edu/flowcyt/educate/pptslide.htm Agradecimentos: •Dr. Robert Murphy, Carnegie Mellon University, Pittsburgh, PA •Dr. J. Paul Robinson, Purdue University Cytometry Laboratories Dr. Carleton Stewart,RPCI Laboratory of Flow Cytometry, Buffalo,NY •B. H. Davis, William Beaumont Hospital, Royal Oak, Michigan Faculdade de Medicina da Universidade Federal da Bahia

2 O que é a citometria de fluxo:

3 Avaliação de sub-populações celulares: quadrantes CD4 e CD8. Log FITC Fluorescence (CD8).1 1 10 1001000 Log PE Fluorescence (CD4).1.1 1 10 100 12 34 45% 2% 26% 27%

4 Avaliação de ativação celular: explosão respiratória. DCFH-DA DCFH-DA DCFH DCF H O 2 2 2 2

5 Análise de divisão celular. G2G2G2G2 M G0G0G0G0 G1G1G1G1 s 0 200 400 600 8001000 G0G0G0G0 G1G1G1G1 s G2G2G2G2M DNA Analysis DNA content CountCount 2N 4N

6 Análise de DNA 0 200 400 600 8001000 PI Fluorescence Counts 0 75 150 225 300 2N 4N

7 Influxo de cálcio

8 Análise de reticulócitos log Thiazole Orange.1 1000 100 10 1 RMI = 0 log Thiazole Orange.1 1000 100 10 1 R1R1R1R1 R2R2R2R2 R3R3R3R3 R4R4R4R4 RMI = 34 R1R1R1R1 R2R2R2R2 R3R3R3R3 R4R4R4R4

9 Citômetro de fluxo Computer System Detector & Mechanical Fluidics

10 Célula de Fluxo Injector Tip Fluorescence signals Focused laser beam Sheath fluid

11 90 Degree Light Scatter FALS Sensor 90LS Sensor Laser

12 Detectores de fluorescência Fluorescence FALS Sensor Fluorescence detector (PMT3, PMT4 etc.)

13 Marcadores fluorescentes Fluorescein (FITC) 400 nm600 nm700 nm Wavelength 500 nm Excitation Emission

14 Cromógenos Ethidium PE cis-Parinaric acid Texas Red PE-TR Conj. PI FITC 600 nm300 nm500 nm700 nm400 nm 457 350 514610632488 Common Laser Lines

15 Imunofenotipagem: marcação celular CD2 CD4 CD # = cluster designation number

16 Imunofenotipagem Log FITC 1000 100 10 1.1

17 Light scatter gating 90 Degree Scatter 0 200 400 600 8001000 8 15 20 30 40 50 100 200 1000 Lymphocytes Monocytes Neutrophils Side Scatter Projection Scale

18 Avaliação de sub-populações celulares: quadrantes CD4 e CD8. Log FITC Fluorescence (CD8).1 1 10 1001000 Log PE Fluorescence (CD4).1.1 1 10 100 12 34 45% 2% 26% 27%


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