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Fagocitose De Células Apoptóticas Por Macrófagos Humanos Análise Por Citometria De Fluxo.

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1 Fagocitose De Células Apoptóticas Por Macrófagos Humanos Análise Por Citometria De Fluxo

2 Células apoptóticas são fagocitadas pelos macrófagos humanos?

3 Materiais Populações de Macrófagos Neutrófilos Células apoptóticas Marcadores: CMFDA (5-cloromethylfluorescein diacetate) CD 14 CD 15 CD 16 CD 62

4 Métodos Citometria de Fluxo Microscopia Fluorescência

5 Problemas Lavagem dos macrófagos – perda de células Dificuldade na discriminação de células interiorizadas e periféricas Quantificação microscópica demorada e pode conter erros significativos

6 Métodos Amostra em fases – Percoll Sangue periférico Células mononucleares Células polimorfonucleares Separar os polimorfonucleares (95% neutrófilos) Ressuspender Centrifugar Incubar

7 Métodos Neutrófilos são marcados com CMFDA Macrófagos incubados com neutrófilos Promove-se a fagocitose Análise por citometria

8 Resultados – CMFDA CMFDA marca os neutrófilos sem afectar o processo de apoptose. Não altera a velocidade da fagocitose Não interfere na superfície da célula Não altera a viabilidade dos macrófagos

9 Resultados – Fluorescência Duas populações distintas de neutrófilos Uniformidade da marcação Intensidade da fluorescência

10 Resultados – Fagocitose R1 analisado por fotomicroscopia 96% macrófagos fagocitaram. R2 e R3 percentagem reduzida (3%)

11 Resultados – Taxa Fagocítica Variações da taxa de fagocitose com estímulos exteriores

12 Resultados – Resposta Fagocítica Resposta fagocítica máxima demorada Subestimada

13 Resultados – Lavagens Perda de células Diminuição da capacidade fagocítica Subestimada

14 Discussão Apoptose e remoção das células apoptóticas é fundamental A quantidade de ensaios aumenta a hipótese de erros

15 Discussão A citometria de fluxo é um importante mecanismo: Na distinção das células interiorizadas, das periféricas, Remoção do erro do observador, Elevado número de amostras, Não necessita de lavagens.

16 Ciência Viva Sara Jorge Julho 2010


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