A apresentação está carregando. Por favor, espere

A apresentação está carregando. Por favor, espere

Vacinas de nova geração para Rotavirus Ciência em Portugal – Ciência 2007 A5 – Biologia, Biotecnologia, Bioquímica Lisboa, 13/Abril/2007 Paula Alves Laboratório.

Apresentações semelhantes


Apresentação em tema: "Vacinas de nova geração para Rotavirus Ciência em Portugal – Ciência 2007 A5 – Biologia, Biotecnologia, Bioquímica Lisboa, 13/Abril/2007 Paula Alves Laboratório."— Transcrição da apresentação:

1 Vacinas de nova geração para Rotavirus Ciência em Portugal – Ciência 2007 A5 – Biologia, Biotecnologia, Bioquímica Lisboa, 13/Abril/2007 Paula Alves Laboratório de Tecnologia de Células Animais

2 Rotavirus Causa de ~ 40% das hospitalizações devidas a Gastroenterites agudas Aprox mortes/ano em 111 millhões de episódios de diarreia aguda em crianças com idades inferiores a 5 anos) Vacinas para ROTAVIRUS (no mercado desde 2006) Virus atenuados em cultura RotaTeq TM (aprovada pela FDA) Rotarix TM (aprovada pela EMEA) VP 2 VP 4 VP 6 VP 7 VP 3 VP 1 98 nm Reoviridae Family VACINAS DE NOVA GERAÇÃO VLP (Virus Like Particles) – Partículas Semelhantes a Vírus

3 i. Eficazes - mimetizam particulas virais nativas (conformação e apresentação dos antigénios ao sistema imunitário) ii. Seguras (não contêm material genético – ADN e ARN) iii. Custos reduzidos (após optimização dos processos de produção) VLPs (Virus Like Particles) – Partículas Semelhantes a Vírus VLPs já no mercado: Hepatite B (desde 1986) Virus do Papiloma Humano (HPV) : Gardasil® e Cervarix® Primeira vacina no mercado contra o cancro cervical VLPs com UMA única VLPs com UMA única proteína viral

4 Rotavirus-Like Particles Ingenasa VLP para PPV (irá ser comercializada pela Ingenasa (Espanha) Innogenetics VLP candidata para HIV (utilizada em testes de diagnostico pela Innogenetics Lab TCA VLP para ROTAVÍRUS

5 Desenvolvimento de Bioprocessos para produção de Rota VLPs Formação das VLPs Estatistica da infecção Expressão das proteínas Re-desenhar o genoma do Baculovirus (a nível dos promotores dos genes das proteinas recombinantes) Re-desenhar estratégias de infecção (MOI and TOI) Monomeros das proteínas virais nas proporções e nos tempos ideais (Estequiometria e termodinâmica) OBJECTIVO

6 Membrana Nuclear Membrana Celular Infecção com 3 Baculovirus Recombinantes (transportam genes que codificam as proteínas vp2, vp6 e vp7) vp2 gene vp6 gene vp7 gene 1 H+H+ H+H+ H+H+ H+H+ H+H+ H+H+ H+H+ H+H+ H+H+ H+H+ H+H+ H+H+ 2 vDNA 3 4 VP 2 VP 7 VP 6 mRNA 5 6 Monomers of VP 7 Particulas duplas 2/6 VLP Monomeros de VP 7 Trimeros de VP 6 Partículas 2/6/7 VLP (triplas) 7

7 Infecção Caracterização das cinéticas de infecção dos baculovirus Tráfego viral na célula hospedeira Purificação VLPs Purificação Montagem VLPs Montagem em partículas formadas correctamente (três camadas) Estratégias de assembly/disasembl y/reasembly Replicação do transADN (vp2, vp6 and vp7) Transcrição - mARN (vp2, vp6 and vp7) Produção das proteínas recombinantes (VP2, VP6 and VP7) Expressão dos genes Gradientes de CsCl (ultracentrif.) Filtração Gel Chromatografia Ultrafiltração Western blot, HPLC, Proteína total ELISA Espect. de massa Microscopia Q-PCR RT-Q-PCR Western blot, HPLC, Proteína total Técnicas analíticas

8 MODELAÇÃO DA PRODUÇÃO DE VLPs PARA ROTAVIRUS j Colaboração com grupo Rui Oliveira Cinéticas de Infecção do Baculovirus e tráfego viral 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1, Time (hpi) 0 1,5 3,0 4,5 6,0 7,5 9,0 N i (Cell.ml - 1 ) 10 6 V (Virus.ml - 1 ) 10 6 Sintese do mARN RNA 7 (CopiesDNA.cell - 1 ) Time (hpi) Protein ProductionProdução de Proteinas 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1, Time (hpi) VP 7 (AU.ml - 1 ) 10 3 Expressão dos genes Replicação ADN 0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 DNA 6 T (CopiesDNA.cell - 1 ) Time (hpi) Montagem dasVLPs VLP ( g.ml - 1 ) bVP2+bVP6+bVP7bVP2/6/7

9 Desenvolvimento de Bioprocessos para produção de Rota VLPs Re- desenhar o genoma do Baculovirus Re- desenhar estratégias de infecção Formação das VLPs Estatistica da infecção Expressão das proteínas Monomeros das proteínas virais nas proporções e nos tempos ideais (Estequiometria e termodinâmica) 1.Antonis AF, Bruschke CJ, Rueda P, Maranga L, Casal JI, Vela C, Hilgers LA, Belt PB, Weerdmeester K, Carrondo MJ, Langeveld JP., A novel recombinant virus-like particle vaccine for prevention of porcine parvovirus-induced reproductive failure. Vaccine, 24(26): Vieira, HLA, Estevão, C, Roldão, A, Peixoto, C, Sousa, M, Cruz, PE, Carrondo MJT, Alves, PM (2005) Triple layered rotavirus VLP assembly: kinetics of vector replication, mRNA stability and recombinant protein production, Journal of Biotechnology, 120: Vieira, HLA, Pereira, ACP, Carrondo, MJT, Alves, PM (2006) Catalase effect on apoptosis for the improvement of recombinant protein production in baculovirus-insect cell system, Bioprocess Biosystems Engineering., 29, Peixoto, C, Sousa, MFQ, Silva, AC, Carrondo, MJT, Alves, PM (2007) Downstream Processing of Triple-layered Rotavirus Like Particles, Journal of Biotechnology, 127, Roldão, A, Vieira HLA, Alves, PM, Oliveira, R, Carrondo, MJT (2007) Intracellular dynamics in Rotavirus-like particles production: Evaluation of multigene and monocistronic infection strategies. Process Biochemistry, 41, Roldão, A, Vieira, HLA, Charpilienne, A, Poncet, D, Roy, P, Carrondo, MJT, Alves, PM, Oliveira, R (2007) Modeling Rotavirus-Like Particles production: infection kinetics, baculovirus DNA replication, mRNA synthesis and protein production J Biotechnology, 128(4):

10 Financiamento European Commission (QLRT ) FCT (FCT/POCTI/BIO/55975/2004) SFRH/BPD/14575/2003 SFRH/BD/21910/2005 Lab TCA (ITQB/IBET) Equipa Rotavirus Paula Alves Manuel J. T. Carrondo Helena VieiraAntónio Roldão Cristina C. Peixoto Claudia Istrate Marcos F.Q. Sousa Catarina Estêvão Rosário Clemente Candida Mellado FCT-UNL (Portugal) Rui Oliveira LSHTM (UK) Polly Roy CNRS (France) Jean Cohen Didier Poncet Annie Charpilienne Karolinska (Sweden) Lennart Svensson Hopitaux de Paris (France) Nathalie Parez RVC (UK) Janice Bridger CIC Vaccinologie C Pasteur (France) Odile Launay


Carregar ppt "Vacinas de nova geração para Rotavirus Ciência em Portugal – Ciência 2007 A5 – Biologia, Biotecnologia, Bioquímica Lisboa, 13/Abril/2007 Paula Alves Laboratório."

Apresentações semelhantes


Anúncios Google