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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS CENTRO DE DESENVOLVIMENTO TECNOLÓGICO CURSO DE GRADUAÇÃO EM BIOTECNOLOGIA DICIPLINA DE GENÔMICA II AULA PRÁTICA: PCR-RFLP.

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1 UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS CENTRO DE DESENVOLVIMENTO TECNOLÓGICO CURSO DE GRADUAÇÃO EM BIOTECNOLOGIA DICIPLINA DE GENÔMICA II AULA PRÁTICA: PCR-RFLP E SEQUENCIAMENTO AULA PRÁTICA: PCR-RFLP E SEQUENCIAMENTO Helena Strelow Thurow Pelotas, abril de 2011

2 PCR-RFLPPCR-RFLP

3 Fragmento amplificado: 199pb Sitio da Enzima BstUI: CGCG

4 digestão–AciIouSfcI DNA PCR eletroforeseaná lise em gel eletroforese Enzymatic cleavage Bst U I DNA PCR Electrophoresis Electrophoresis Enzyme Agarose gel analysis analysis

5 199pb Amplificação do fragmento do SNP Arg72Pro

6 199pb199pb 113pb113pb 86pb86pb Arg Pro Arg Pro Arg Pro Arg Pro Arg Genotipagem das amostras para o SNP Arg72Pro

7 Arginina

8 Prolina Arginina

9 Prolina

10

11 SEQUENCIAMENTOSEQUENCIAMENTO

12 Pré-mix PrimerDNA vortex + sequenciamento 2ul

13 PURIFICAÇÃOPURIFICAÇÃO SEQUENCIAMENTOSEQUENCIAMENTO PRÓXIMAS ETAPAS...

14


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