Obtenção de Cultivares Transgênicas

Apresentação em tema: "Obtenção de Cultivares Transgênicas"— Transcrição da apresentação:

1 Obtenção de Cultivares Transgênicas
Grupo 4: Filipi Rodrigues Nathalia Brancalleão Renata Rebellato Linhares Tarcísio Vasconcelos

2 Início Seleção de sementes das melhores plantas e de seus cruzamentos espontâneos primeira planta transgênica com gene codificante para a resistência contra o antibiótico canamicina introduzido em plantas de fumo

3 Transformação genética
Inserção direta de um gene de interesse Genes da própria espécie, de outras espécies ou sintéticos

4 Métodos de transformação
Agrobacterium tumefaciens Bombardeamento

5 Ferramentas essenciais
Conhecimento da Cultura Bioinformática Clonagem Microbiologia Definição do método de transformação Cultura de tecidos vegetais Biologia molecular

6 Bioinformática Definição do gene de interesse
Estudo dos sítios de restrição Desenho de primers

7 Clonagem – Agrobacterium tumefaciens
Inserção do gene em vetores de expressão Adição de promotores Inserção dos vetores

8 Gene Escolhido – npr1 isoforma 7

9 PCR

10 Clonagem inicial – vetor de clonagem
Fácil inserção do gene Genes de seleção

11 Produto inicial

12 Inserção do vetor na bactéria – E. coli
Crescimento bacteriano Seleção de colônias transformadas Replicação do DNA Avaliação da inserção por digestão enzimática

13 Avaliação enzimática 1

14 Inserção no vetor intermediário

15 Inserção do vetor na bactéria – E. coli
Crescimento bacteriano Seleção de colônias transformadas Replicação do DNA Avaliação da inserção por digestão enzimática

16 Avaliação enzimática 2

17 Inserção no vetor final

18 Inserção do vetor na bactéria – E. coli
Crescimento bacteriano Seleção de colônias transformadas Replicação do DNA Avaliação da inserção por digestão enzimática

19 Avaliação enzimática 3

20 Inserção do vetor final em A. tumefaciens
Via eletroporação Choque térmico Sequenciamento

21 Transformação genética
Escolha de explantes Protocolo de regeneração Uso de reguladores vegetais para regeneração de plantas Regenerar a célula transformada em uma planta completa transformada

22 Via A. tumefaciens Contato entre explante e A. tumefaciens transformada.

23 Co-cultivo Cultura conjunta por poucos dias de planta e bactéria, sem antibióticos – disco foliares

24 Bombardeamento Partículas de ouro ou tungstênio recobertas pelo vetor de transformação Vetor de aproximadamente 15Kb Bombardeador de alta pressão de gás Helio

25 Seleção Cultivo em meio com antibiótico Canamicina Cefotaxima
Seleção de brotações adventícias transformadas Cefotaxima Eliminação de A. tumefaciens

26 Regeneração

27 Regeneração

28 Regeneração

29 Aclimatização

30 Avaliação Expressão transiente PCR Southern Blot Western Blot qPCR
RT-PCR

31 Expressão transiente

32 PCR

33 Obrigado