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Seleção de sementes das melhores plantas e de seus cruzamentos espontâneos 1983 - primeira planta transgênica com gene codificante para a resistência.

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Apresentação em tema: "Seleção de sementes das melhores plantas e de seus cruzamentos espontâneos 1983 - primeira planta transgênica com gene codificante para a resistência."— Transcrição da apresentação:

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2 Seleção de sementes das melhores plantas e de seus cruzamentos espontâneos primeira planta transgênica com gene codificante para a resistência contra o antibiótico canamicina introduzido em plantas de fumo

3 Inserção direta de um gene de interesse Genes da própria espécie, de outras espécies ou sintéticos

4 Agrobacterium tumefaciens Bombardeamento

5 Conhecimento da Cultura Bioinformática Clonagem Microbiologia Definição do método de transformação Cultura de tecidos vegetais Biologia molecular

6 Definição do gene de interesse Estudo dos sítios de restrição Desenho de primers

7 Inserção do gene em vetores de expressão Adição de promotores Inserção dos vetores

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10 Fácil inserção do gene Genes de seleção

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12 Crescimento bacteriano – Seleção de colônias transformadas – Replicação do DNA Avaliação da inserção por digestão enzimática

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15 Crescimento bacteriano – Seleção de colônias transformadas – Replicação do DNA Avaliação da inserção por digestão enzimática

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18 Crescimento bacteriano – Seleção de colônias transformadas – Replicação do DNA Avaliação da inserção por digestão enzimática

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20 Via eletroporação Choque térmico Sequenciamento

21 Escolha de explantes Protocolo de regeneração – Uso de reguladores vegetais para regeneração de plantas – Regenerar a célula transformada em uma planta completa transformada

22 Contato entre explante e A. tumefaciens transformada.

23 Cultura conjunta por poucos dias de planta e bactéria, sem antibióticos – disco foliares

24 Partículas de ouro ou tungstênio recobertas pelo vetor de transformação Vetor de aproximadamente 15Kb Bombardeador de alta pressão de gás Helio

25 Cultivo em meio com antibiótico – Canamicina Seleção de brotações adventícias transformadas – Cefotaxima Eliminação de A. tumefaciens

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30 Expressão transiente PCR Southern Blot Western Blot qPCR RT-PCR

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