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DETECÇÃO MOLECULAR DO HPV EM PACIENTES ENCAMINHADAS À URS – SAGRADA FAMÍLIA - PBH Vanessa Carla de Moraes Gonçalves Cirino Orientadora: Profa. Annamaria.

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1 DETECÇÃO MOLECULAR DO HPV EM PACIENTES ENCAMINHADAS À URS – SAGRADA FAMÍLIA - PBH Vanessa Carla de Moraes Gonçalves Cirino Orientadora: Profa. Annamaria Ravara Vago PAD – Departamento de Morfologia - ICB – UFMG Laboratório de Biologia das Interações Celulares

2 INCIDÊNCIA DO CÂNCER DO COLO DO ÚTERO 15% DE TODAS AS CATEGORIAS DE CÂNCER FEMININO 2 O TIPO DE NEOPLASIA MAIS COMUM ENTRE AS MULHERES MAIOR INCIDÊNCIA ENTRE MULHERES DE 40 A 60 ANOS 40.000 NOVOS CASOS SÃO DIAGNOSTICADOS A CADA ANO

3 Estimativas para o ano 2005 das taxas brutas de incidência por 100.000 e de número de casos novos por câncer, em mulheres, segundo localização primária. Localização Primária Neoplasia maligna Estimativa dos Casos Novos Minas Gerais Belo Horizonte Casos Taxa Bruta Casos Pele não Melanoma 5.44055,9684066,43 Mama Feminina 4.22043,4685066,99 Traquéia, Brônquio e Pulmão 7707,9513010,41 Estômago8008,2416012,93 Colo do Útero 1.58016,2730023,28 Cólon e Reto 1.11011,4527021,25 Esôfago3503,61403,47 Leucemias4104,19806,09 Cavidade Oral 3303,38604,86 Pele Melanoma 2102,21604,67 Outras Localizações 7.01072,121.490117,32 Total22.230228,754.280337,39

4 HISTOLOGIA Connective Tissue Tissue Stratified Squamous Epithelium Epithelium

5 INCIDÊNCIA DAS NEOPLASIAS

6 NEOPLASIAS INTRAEPITELIAIS CERVICAIS

7 COILOCITOSE

8 Nova Classificação Bethesda System. NIC I » lesão escamosa intra-epitelial de baixo grau (LSIL) NIC II, III e carcinoma in situ » lesão escamosa intra-epitelial de alto grau (HSIL) Células escamosas atípicas de significado indeterminado » ASCUS Células glandulares atípicas de significado indeterminado » AGUS

9 FATORES DE RISCO Infecção por HPV Paridade elevada Início precoce da vida sexual ativa Multiplicidade de parceiros sexuais Tabagismo Uso de contraceptivo oral Casos de imunossupressão Baixo nível socioeconômico

10 VIAS DE TRANSMISSÃO Sexual Neonatal Através de pinças, luvas, roupas, equipamentos, etc.

11 VÍRUS DO PAPILOMA HUMANO (HPV) : 1, 2, 6, 11, 26, 40, 42, baixo risco : 1, 2, 6, 11, 26, 40, 42, 53- 55, 57, 59, 66 e 68; 53- 55, 57, 59, 66 e 68; : 5, 8, 16, 18, 31, médio e alto risco : 5, 8, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56 e 59; 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56 e 59; Câncer de pele Câncer de mucosas 1, 2, 5 e 8 16, 18, 31 e 45

12 O GENOMA DO HPV Dupla Hélice de DNA circular, 8000 pb, 3 segmentos: Early-region (E) – E1, E2, E4, E5, E6, E7 Late-region (L) – L1 e L2 Long control region (LCR)

13 MÉTODOS DE DETECÇÃO CLÍNICO - LABORATORIAIS Citopatológico Colposcópico Histopatológico

14 MÉTODOS DE DETECÇÃO MOLECULARES Captura Híbrida Hibridização com sondas PCR – Reação em Cadeia da Polimerase

15 OBJETIVO Realizar a extração do DNA e detecção de um fragmento do genoma viral amplificado por PCR das amostras cervicais coletadas de pacientes na URS – Sagrada Família.

16 METODOLOGIA METODOLOGIA

17 POPULAÇÃO ESTUDADA

18 DESENHO EXPERIMENTAL PACIENTES ENCAMINHADAS n = 150 COLETA DE AMOSTRAS ECTO E ENDOCERVICAIS EXTRAÇÃO DE DNA COLORAÇÃO Ag + PCR ELETROFORESE GEL DE POLIACRILAMIDA Proteinase K Fenol: Clorofórmio: IAA

19 MECANISMO DO PCR

20 PCR – fragmento de 150 pb do genoma viral ( Região de L1) Primers : GP5 e GP6 (Grce et al, 2003) Programa de 40 ciclos

21 PRODUTO DE AMPLIFICAÇÃO DO FRAGMENTO DE 150 pb DO GENOMA DO HPV 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

22 PRODUTO DE AMPLIFICAÇÃO DO FRAGMENTO DE 110 pb DO GENE DE β–GLOBINA HUMANO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

23 RESULTADOS Amostras coletadas 150 Extração de DNA110 PCR – β-Globina110 PCR – HPV34

24 RESULTADOS N o das AmostrasN o do ProntuárioPCR β- globinaPCR HPV Lesão 02 2004019029 ++NIC II – HPV 04 2003004879-1 +-NIC I 06 9901919-7 ++Pni 07 2004019487-1 +-NIC I – HPV 11 2001034329-1 +-NIC I – HPV 12 2003023087-5 +-NIC I – HPV 13 2004019778-1 +-NIC I – HPV 14 2004020052-9 +-ALT 16 2004020132-0 ++NIC I – HPV 18 2004011911-0 +-CI 19 990069203 +-Pni 20 2004020482-6 +-NIC I – PI 31 2004019922-9 +-Carcinoma in situ 32 200103364-8 ++Pni 33 2004023003-7 +-NIC I – HPV 36 2003028239-5 ++NIC I – HPV 37 2004023678-7 +-Citologia p/ HPV

25 RESULTADOS 39 2004020168-1 +-NIC I – HPV 43 2004018681-0 +-NIC I – HPV 80M.M.M.R.+-NIC I – HPV 86 2004024689-8 ++NIC I – HPV 172 2003011768-8 +-NIC I – HPV 178 980089350 +-Carcinoma in situ 182 2004017407-2 +-NIC II – HPV 183 2000012065-6 +-NIC I – HPV 184 2005009275-3 +-Carcinoma in situ 185 2005091625 ++Pni 186 2004025760-1 +-Pni 188 2003022379-8 +-Carcinoma in situ 194 980237561 +-NIC I – HPV 197 2005010841-2 +-Citologia negativa 198 2003036975-0 +-NIC II – HPV 202 2004012022-3 +-NIC II

26 RESULTADOS LesãoPCR + HPV NIC In=16 3 NIC IIn=04 1 NIC III/Carcinoma in situ n=04 0

27 OBJETIVOS FUTUROS Realizar a comparação entre os achados clínico-colposcópicos, citológicos, histopatológicos e moleculares obtidos nas amostras analisadas. Realizar a detecção dos subtipos de HPV.

28 AGRADECIMENTOS Professora Annamaria Ravara Vago Pacientes participantes deste Projeto de Pesquisa Professora Cleida A. Oliveira Lucas, Didi, Sandra Moraes (Mãe) e Altair Cirino (Pai) Amigos do Laboratório (Alan,Soraya,Dani,Eduardo e Jane) Equipe do Serviço de Patologia da URS – Sagrada Família (Médicos, Enfermeiros e Auxiliares de Enfermagem).


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