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“DETECÇÃO MOLECULAR DO HPV EM PACIENTES ENCAMINHADAS

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Apresentação em tema: "“DETECÇÃO MOLECULAR DO HPV EM PACIENTES ENCAMINHADAS"— Transcrição da apresentação:

1 “DETECÇÃO MOLECULAR DO HPV EM PACIENTES ENCAMINHADAS
À URS – SAGRADA FAMÍLIA - PBH” Vanessa Carla de Moraes Gonçalves Cirino Orientadora: Profa. Annamaria Ravara Vago PAD – Departamento de Morfologia - ICB – UFMG Laboratório de Biologia das Interações Celulares

2 INCIDÊNCIA DO CÂNCER DO COLO DO ÚTERO
15% DE TODAS AS CATEGORIAS DE CÂNCER FEMININO 2O TIPO DE NEOPLASIA MAIS COMUM ENTRE AS MULHERES MAIOR INCIDÊNCIA ENTRE MULHERES DE 40 A 60 ANOS NOVOS CASOS SÃO DIAGNOSTICADOS A CADA ANO

3 Estimativas para o ano 2005 das taxas brutas de incidência por
e de número de casos novos por câncer, em mulheres, segundo localização primária. Localização Primária Neoplasia maligna Estimativa dos Casos Novos Minas Gerais Belo Horizonte Casos Taxa Bruta Pele não Melanoma 5.440 55,96 840 66,43 Mama Feminina 4.220 43,46 850 66,99 Traquéia, Brônquio e Pulmão 770 7,95 130 10,41 Estômago 800 8,24 160 12,93 Colo do Útero 1.580 16,27 300 23,28 Cólon e Reto 1.110 11,45 270 21,25 Esôfago 350 3,61 40 3,47 Leucemias 410 4,19 80 6,09 Cavidade Oral 330 3,38 60 4,86 Pele Melanoma 210 2,21 4,67 Outras Localizações 7.010 72,12 1.490 117,32 Total 22.230 228,75 4.280 337,39

4 HISTOLOGIA Connective Tissue Stratified Squamous Epithelium

5 INCIDÊNCIA DAS NEOPLASIAS

6 NEOPLASIAS INTRAEPITELIAIS CERVICAIS

7 COILOCITOSE

8 Nova Classificação Bethesda System.
NIC I » lesão escamosa intra-epitelial de baixo grau (LSIL) NIC II, III e carcinoma in situ » lesão escamosa intra-epitelial de alto grau (HSIL) Células escamosas atípicas de significado indeterminado » ASCUS Células glandulares atípicas de significado indeterminado » AGUS

9 FATORES DE RISCO Infecção por HPV Paridade elevada
Início precoce da vida sexual ativa Multiplicidade de parceiros sexuais Tabagismo Uso de contraceptivo oral Casos de imunossupressão Baixo nível socioeconômico

10 VIAS DE TRANSMISSÃO Sexual Neonatal Através de pinças, luvas, roupas,
equipamentos, etc.

11 VÍRUS DO PAPILOMA HUMANO (HPV)
baixo risco : 1, 2, 6, 11, 26, 40, 42, 53- 55, 57, 59, 66 e 68; médio e alto risco: 5, 8, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56 e 59; 1, 2, 5 e 8 Câncer de pele 16, 18, 31 e 45 Câncer de mucosas

12 O GENOMA DO HPV Dupla Hélice de DNA circular, 8000 pb, 3 segmentos:
“Early-region” (E) – E1, E2, E4, E5, E6, E7 “Late-region” (L) – L1 e L2 “Long control region” (LCR)

13 CLÍNICO - LABORATORIAIS
MÉTODOS DE DETECÇÃO CLÍNICO - LABORATORIAIS Citopatológico Colposcópico Histopatológico

14 MÉTODOS DE DETECÇÃO MOLECULARES Captura Híbrida
Hibridização com sondas PCR – Reação em Cadeia da Polimerase

15 OBJETIVO URS – Sagrada Família.
Realizar a extração do DNA e detecção de um fragmento do genoma viral amplificado por PCR das amostras cervicais coletadas de pacientes na URS – Sagrada Família.

16 METODOLOGIA

17 POPULAÇÃO ESTUDADA

18 DESENHO EXPERIMENTAL PCR n = 150 Proteinase K Fenol: Clorofórmio: IAA
PACIENTES ENCAMINHADAS n = 150 COLETA DE AMOSTRAS ECTO E ENDOCERVICAIS Proteinase K Fenol: Clorofórmio: IAA EXTRAÇÃO DE DNA PCR ELETROFORESE GEL DE POLIACRILAMIDA COLORAÇÃO Ag+

19 MECANISMO DO PCR

20 PCR – fragmento de 150 pb do genoma viral ( Região de L1)
Primers : GP5 e GP6 (Grce et al, 2003) Programa de 40 ciclos

21 PRODUTO DE AMPLIFICAÇÃO DO FRAGMENTO DE 150 pb DO GENOMA DO HPV

22 PRODUTO DE AMPLIFICAÇÃO DO FRAGMENTO DE 110 pb
DO GENE DE β–GLOBINA HUMANO

23 RESULTADOS 150 Extração de DNA 110 PCR – β-Globina PCR – HPV 34
Amostras coletadas 150 Extração de DNA 110 PCR – β-Globina PCR – HPV 34

24 RESULTADOS No das Amostras No do Prontuário PCR β- globina PCR HPV
Lesão 02 + NIC II – HPV 04 - NIC I 06 Pni 07 NIC I – HPV 11 12 13 14 ALT 16 18 CI 19 20 NIC I – PI 31 Carcinoma in situ 32 33 36 37 Citologia p/ HPV

25 RESULTADOS 39 2004020168-1 + - NIC I – HPV 43 2004018681-0 80 M.M.M.R.
172 178 Carcinoma in situ 182 NIC II – HPV 183 184 185 Pni 186 188 194 197 Citologia negativa 198 202 NIC II

26 RESULTADOS Lesão PCR + HPV NIC I n=16 3 NIC II n=04 1
NIC III/Carcinoma in situ

27 OBJETIVOS FUTUROS Realizar a comparação entre os achados
clínico-colposcópicos, citológicos, histopatológicos e moleculares obtidos nas amostras analisadas. Realizar a detecção dos subtipos de HPV.

28 AGRADECIMENTOS Professora Annamaria Ravara Vago
Equipe do Serviço de Patologia da URS – Sagrada Família (Médicos, Enfermeiros e Auxiliares de Enfermagem). Pacientes participantes deste Projeto de Pesquisa Professora Cleida A. Oliveira Lucas, Didi , Sandra Moraes (Mãe) e Altair Cirino (Pai) Amigos do Laboratório (Alan,Soraya,Dani,Eduardo e Jane)


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