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A necessidade de produção de um kit nacional para distribuição na rede pública de saúde Profª Drª Adele Caterino-de-Araujo Instituto Adolfo Lutz de São.

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1 A necessidade de produção de um kit nacional para distribuição na rede pública de saúde Profª Drª Adele Caterino-de-Araujo Instituto Adolfo Lutz de São Paulo

2 Ensaios sorológicos – HTLV-1/2 S e m i n á r i o E s t a d u a l e m H T L V Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012 Triagem EIA (Murex HTLV-I+II, Abbott; Biolisa HTLV-I+II 5.0, Biokit; Gold Elisa HTKLV-I+II, REM) CMIA (Archtect rHTLV-I/II, Abbott) Confirmatórios WB 2.4 (Abbott) INNOLIA (Innogenetics) PCR (in house)

3 S e m i n á r i o E s t a d u a l e m H T L V Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012 EIA de 3a geração – disponíveis no mercado nacional (custo: até R$ 5,00 por orifício) Murex HTLV-I + II, Abbott Peptídeos sintéticos env gp46 HTLV-I e HTLV-II+ rgp21 HTLV-II, conjugado os mesmos Ags env* + rgp21 HTLV-I* peroxidase, TMB, 450 nm. Detecta IgG, IgM e IgA BioELISA HTLV , Biokit Três proteínas recombinantes de HTLV-1 e HTLV-2, conj. uma proteína de fusão tripla*peroxidase, OPD, 492nm. Detecta IgG, IgM e IgA Gold Elisa HTLV-1/2, REM Antígenos recombinantes HTLV-1 e HTLV-2, conj. mesmos Ags* peroxidase, OPD, 492nm. Detecta IgG, IgM e IgA Ensaios sorológicos – HTLV-1/2

4 S e m i n á r i o E s t a d u a l e m H T L V Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012 ARCHITECT rHTLV I/II, Abbott Sistema Automatizado Partículas magnéticas cobertas com rgp21 (HTLV-I e HTLV-II) e peptídeos sintéticos de gp46 (HTLV-I) e gp46 (HTLV-II). Detecta anticorpos IgM e IgG Resultados Preliminares em Bancos de Sangue: N = EIA Ortho = 0,08% CMIA Abbott = 0,34% Ensaios sorológicos – HTLV-1/2

5 Proteínas externas de envelope de HTLV-1 e HTLV-2 (gp46) e transmembrana (gp21) S e m i n á r i o E s t a d u a l e m H T L V Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012 MTA-1 aa Id epitopes aa K55 aa Id epitopes aa p21e aa GD21 aa

6 Ensaio de Western blot S e m i n á r i o E s t a d u a l e m H T L V Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012 HTLV Blot 2.4 Lisado HTLV-I+rgp46-I(MTA-1)+rgp46-II(K55) + GD21 Diagnostic Biotechnology, DBL, 1995 Subsequentemente Genelabs e Abbott Ensaio confirmatório e discriminatório (custo: até R$ 250,00 por tira)

7 S e m i n á r i o E s t a d u a l e m H T L V Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012 Ensaio de Western blot 2.4 p24 CS rgp46-I rgp46-II p53 p36 p32 p28 p26 p19 GD21 gp21 NegativoHTLV-1HTLV-2HTLVIndeterminado a Indeterminado b Indeterminado c HTLV-1 e HTLV-2 10

8 S e m i n á r i o E s t a d u a l e m H T L V Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012 INNO-LIA HTLV-I/II assay, Innogenetics Tiras de nylon cobertas com proteínas recombinantes rp19, rp24, rgp21 (HTLV-I e HTLV-II) + peptídeos sintéticos gp46-I (HTLV-I), gp46-II (HTLV- II) e p19-I (HTLV-I) Resultados de acordo com a intensidade das bandas: Ensaio imunocromatográfico – HTLV-1/2 (custo: até R$ 250,00 por tira)

9 S e m i n á r i o E s t a d u a l e m H T L V Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012 Ensaio imunocromatográfico – HTLV-1/2

10 INNO-LIA COMO TESTE CONFIRMATÓRIO PARA INFECÇÃO PELOS VÍRUS HTLV-1/2, UMA BOA ESCOLHA? S e m i n á r i o E s t a d u a l e m H T L V Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012 Disposição das bandas do ensaio INNO-LIA HTLV I/II LiRAS® (Line Reader & Analysis Software) Danielly Paula Alvarenga Silva TC-PAP Orientador: Elizabeth de los Santos Fortuna

11 S e m i n á r i o E s t a d u a l e m H T L V Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012 Ensaio imunocromatográfico – HTLV-1/2 48% positivas 28% Ind. 24% negativas

12 S e m i n á r i o E s t a d u a l e m H T L V Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012 Ensaios moleculares – HTLV-1/2 Reação em cadeia da polimerase (PCR) Ensaios de PCR e hibridização ou nested-PCR PCR para segmentos conservados tax ou pol O uso de primers específicos para HTLV-1 e HTLV-2 permite discriminar o vírus O uso de primers comuns para HTLV-1 e HTLV-2 necessita de análise por RFLP

13 S e m i n á r i o E s t a d u a l e m H T L V Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012 Ensaios moleculares – HTLV-1/2 PCR - Restriction fragmewnt lenght polymorphism analysis Região tax enzima: Taq IHTLV-1 – HTLV-2 + HTLV-I HTLV RFLP tax HTLV-1 e -2 (custo: até R$ 35,00)

14 S e m i n á r i o E s t a d u a l e m H T L V Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012 Threshol d Ensaios moleculares – HTLV-1/2 PCR em tempo real (pol ou tax) TaqMan SYBER Green (custo: até R$ 45,00)

15 S e m i n á r i o E s t a d u a l e m H T L V Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012 O que precisamos fazer? Comparar a sensibilidade e especificidade, valor preditivo positivo e negativo de testes de diagnóstico laboratorial disponíveis no mercado nacional (ELISA, Western Blot e INNOLIA) Padronizar a PCR e nested-PCR para o diagnóstico confirmatório Padronizar a detecção da carga proviral (PCR em tempo real): região tax ou pol e sistema TaqMan ou SyberGreen Sequenciar e caracterizar os HTLV-1 e HTLV-2 que circulam no Brasil e desenvolver um kit contendo proteínas recombinantes e/ou peptídeos sintéticos (gp46, gp21, p19, p24) que representem melhor esses isolados Produzir um kit para o diagnóstico confirmatório usando os conhecimentos obtidos.

16 S e m i n á r i o E s t a d u a l e m H T L V Rio de Janeiro – Brasil / 19 a 22 de setembro de 2012 Lembrar! Das particularidades de cada região geográfica Da infra-estrutura laboratorial Das populações a serem avaliadas Do custo / benefício de cada teste


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