Rio de Janeiro, 10 de Dezembro de 2010 Leandro Santiago Emmerick.

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1 Rio de Janeiro, 10 de Dezembro de 2010 Leandro Santiago Emmerick

2 INTRODUÇÃO Caranguejo da Lama Scylla serrata Taxonomia Característica do sudeste asiático Ampla importância econômica 108 mil toneladas em 2004 na China

3 INTRODUÇÃO MCRV Dicistrovírus - Família recente (2002) Retrovírus, positive- sense fita única (ssRNA), não envelopados 30nm de diâmetro e simetria icosaédrica

4 INTRODUÇÃO MCRV Infectam invertebrados Doença do sono 13 segmentos de RNA Necrose da gills e intestino dos hospedeiros infectados

5 INTRODUÇÃO VP3 121 aminoácidos Região C-terminal é carregada positivamente Sinal para localização e exportação nuclear Induz apoptose celular Muito imunogênica Antígeno produzido durante o processo de infecção e replicação viral

6 OBJETIVO Investigar os mecanismos da infecção por MCDV no caranguejo da lama Controlar a doença viral Estudar a estrutura da proteína VP3

7 E XPERIMENTOS Desenho de primers Expressão de MCDV-VP3 em E. coli Produção de 3 MAbs contra MCDV-VP3 Clonagem, expressão e purificação da recombinante Imunização de camundongos por injeção intraesplênica Caracterização dos MAbs por ELISA e Western Blotting Localização da MCDV-VP3 na superfície externa por MET

8 RESULTADOS Proteína recombinante purificada e principais proteínas estruturais do MCDV

9 1:2.048x10 5 Western blotting ELISA indireto 3 MAbs: 1G6H9 – 1E7B8 – 4B6E10 Os MAbs reconhecem a MCDV-VP3 RESULTADOS

10 VP3 é uma proteína do capsídeo do MCDV RESULTADOS

11 DISCUSSÃO MAbs: alta especificidade e atividade  usadas para diagnóstico VP3 < VP1 e VP2 MAbs reconheceram tanto a nativa quanto a recombinante Os resultados sugerem que VP3 é uma nova proteína estrutural do MCDV

12 CONCLUSÃO Foi obtido e caracterizado com sucesso os MAbs contra MCDV que são altamente sensíveis e específicas tanto para a forma recombinante quanto para a forma nativa da proteína estrutural MCDV- VP3. Os MAbs fornecem uma ferramenta conveniente para uso em laboratório para estudar a biologia básica do MCDV e aprofundar o estudo do imunodiagnóstico da MCDV para controlar MCDV na aquicultura caranguejo da lama e reduzir a perda de produção de caranguejo associados MCDV.

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