Construção de Biblioteca Gênica

Apresentação em tema: "Construção de Biblioteca Gênica"— Transcrição da apresentação:

1 Construção de Biblioteca Gênica
1-Vetor de Clonagem Plasmidial 2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ 3-Biblioteca de cDNA 4-Cromossomo Artificial Bacteriano Edmar Vaz de Andrade

2 1-Vetor de Clonagem Plasmidial
Componentes básicos de vetor plasmidial de clonagem 5 – 10 kb

3 Ciclo Lítico de um Bacteriófago
2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ Ciclo Lítico de um Bacteriófago

4 2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
Formação de placas de lise em cultura de bactérias

5 Genoma do bacteriófago λ
2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ Genoma do bacteriófago λ

6 2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
DNA de preenchimento 1 – Remoção de genes não essenciais 2 – Inserção de sítios de restrição específicos 3 – Introdução de um DNA de preenchimento 4 – Substituição do DNA de preenchimento por um gene de interesse (fragmentos: kb)

7 3-Biblioteca de cDNA Síntese do cDNA

8 Adição de uma extremidade em Gn Hibridização com iniciador Cn
3-Biblioteca de cDNA Adição de uma extremidade em Gn Hibridização com iniciador Cn

9 Síntese do cDNA fita dupla e Metilação
3-Biblioteca de cDNA Síntese do cDNA fita dupla e Metilação

10 Adição de Adaptadores com Sítio de Restrição
3-Biblioteca de cDNA Adição de Adaptadores com Sítio de Restrição

11 Digestão com Enzima de Restrição
3-Biblioteca de cDNA Digestão com Enzima de Restrição

12 Clonagem dos Fragmentos Digeridos no Vetor λ
3-Biblioteca de cDNA Clonagem dos Fragmentos Digeridos no Vetor λ

13 Infecção de Bactérias com o Vetor λ Recombinante
3-Biblioteca de cDNA Infecção de Bactérias com o Vetor λ Recombinante

14 4-Cromossomo Artificial Bacteriano
Genes par derivado do plasmído F. Facilita a distribuição do plasmídio para células filhas Construção de bibliotecas genômicas com insertos de até pb

15 Quando não mencionado, as figuras apresentadas foram retiradas, com ou sem modificações, das seguintes referências: 1. LODISH, H; DARNELL, J. E. e BALTIMORE, D “Biologia Celular e Molecular”, 5ª edição. Artmed Editora SA. Porto Alegre-Brasil. ( 2. LEHNINGER, A. L. NELSON, D. L e COX, M. M “Principles of Biochemistry”. 3ª Edition, Worth Publitions.