A apresentação está carregando. Por favor, espere

A apresentação está carregando. Por favor, espere

1975 - Stanley Cohen Plasmídeo. Conferencia de Asilomar - 1975 Pacific Grove - California USA - 139 cientistas de 17 nações - Recombinant DNA Advisory.

Apresentações semelhantes


Apresentação em tema: "1975 - Stanley Cohen Plasmídeo. Conferencia de Asilomar - 1975 Pacific Grove - California USA - 139 cientistas de 17 nações - Recombinant DNA Advisory."— Transcrição da apresentação:

1 Stanley Cohen Plasmídeo

2 Conferencia de Asilomar Pacific Grove - California USA cientistas de 17 nações - Recombinant DNA Advisory Commitee - RAC Normas para contenção biológica - P1 P4

3 ENZIMAS DE RESTRIÇÃO W. Alber H. SmithD. Nathans

4

5 Ferramentas de trabalho Enzimas de restrição Sistema restrição/modificação Tipo II - utilizadas na TDR: reconhecem seqüências específicas de nucleotídeos no DNA - palíndromos, atuam como verdadeiras tesouras moleculares Tipos de cortes: Produção de terminais coesivos (adesivos, protuberantes) Produção de terminais abruptos (ou cegos)

6 a) Clivagem no eixo de simetria Moléculas com extremidades abruptas Moléculas com extremidades coesivas b) Clivagem simétricamente situada ao redor do eixo de simetria...TC GA......AG CT GAA TTC......CTT AAG

7

8

9

10 ENZIMAS DE RESTRIÇÃO

11 Enzima de restrição EcoRI

12

13

14

15 A tecnologia do DNA recombinante

16 Extremidades coesivas Fragmento de DNA - inserto DNA plasmidial - vetor LIGASE Ligação

17 Construção do DNA Recombinante Molécula de DNA de um plasmídeo circular Clivagem com enzima de restrição Molécula de DNA de um plasmídeo linear com extremidades coesivas anelamento Ligação covalente pela DNA ligase Molécula de DNA plasmidial contendo o inserto Inserção em uma célula hospedeira

18

19 VetoresHospedeirosUtilização Plasmídeos Cosmídeos Virus Bactérias / leveduras clonagem Terapia gênicaCélulas eucarióticas Bacteriófagos

20 Plasmídeos: são usados para clonar fragmentos de DNA de vários pares de bases a centenas de pares de bases. Bacteriófagos: são usados para clonar fragmentos de DNA de pares de bases. Cosmídeos: são estruturas híbridas que possuem características do bacteriófago associadas à do plasmídeo pBR322, e são utilizadas para a clonagem dos maiores segmentos de DNA. Chromosomos artificiais para bactérias (BAC) e leveduras (YACs): podem ser usados para clonagem de fragmentos de DNA com centenas a milhões de pares de bases. Tipos de Vetores

21 Plasmídeo pBR 322

22 Plasmídeo pUC 18

23 Bacteriófago

24 Plasmídeo para leveduras

25 Cosmídeos para leveduras

26 Cromossomo artificial para bactéria

27 Cromossomo artificial para leveduras

28 A tecnologia do DNA recombinante

29

30 Cortar o DNA com enzimas de restrição Inserir fragmentos em vetores Introduzir vetores em bactérias por: eletroporação ou choque térmico Fragmento 1 Fragmento 2 Fragmento 3 Fragmento 4

31 Transformação bacteriana Eletroporação

32 Plaqueamento

33


Carregar ppt "1975 - Stanley Cohen Plasmídeo. Conferencia de Asilomar - 1975 Pacific Grove - California USA - 139 cientistas de 17 nações - Recombinant DNA Advisory."

Apresentações semelhantes


Anúncios Google