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Análise da Capacidade de Multiplicação de Genotipos do M. tuberculosis em Macrófagos Humanos Moisés Palaci.

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1 Análise da Capacidade de Multiplicação de Genotipos do M. tuberculosis em Macrófagos Humanos Moisés Palaci

2 Opsonização Th1 CD8 Th1 CD8 IFN- TNF- Vitamina D 3Mtb ETZ Lisossomos pH NO NO 2 - NO 3 - H 2 O 2 - OH 1 O 2 - NH 4 GL ST LAM Arginina Citrulina NO O2-O2-O2-O2- SOD O 2 - NADPH Hemolisina Ions regulating factors CR1/CR3/CR4 RPS-A Scavenger receptor CD 14 MMR TLR2/TLR4 NOS2 katG rpoV ST noxR1 ahpC noxR3 LAM Citoplasma Genes IFN- Virulência

3 Célula de Langhans Coroa de linfócitos / histiócitos Céls. epitelióides Necrose caseosa Lesões nodulares caseificadas Lesões cavitárias Tuberculose Aspectos Patológicos D = n x V x H I in x I ad Formula de Rich

4 Cepas de M. tuberculosis com Elevada Capacidade de Disseminação (Anos 90) Estados Unidos da América C - Strain Friedman et al, 1997 W - Strain (MDR) Frieden et al, 1996 NY CDC1551 Valway et al, 1998 KY/TN Strain Barnes et al, 1997 LA

5 Diversidade Genética de Mycobacterium tuberculosis por RFLP Beijing, EAI LAM; Haarlem LAM; Beijing Beijing BeijingHaarlemLAM

6 A Resistência à Drogas Interfere na Virulência do Mtb? Estudos Epidemiológicos. Narain et al, 1967 (India). Devadatta et al, 1970 (India). Siminel et al, 1979 (Romênia) Estudos Experimentais. Mitchison et al, Magarão, Daddi, 1994 SIM Estudos Epidemiológicos. Snider et al, Teixeira et al, 2001 (Brasil) Estudos Experimentais Ordway et al, 1995 Não

7 Avaliação da Virulência Capacidade de: infectar / causar doença Capacidade de: infectar / causar doença / disseminar Modelos Animais Modelos Epidemiológicos Friedman et al, J Infect Dis, 1997 Valway et al. N Engl J Med, 1998 López et al, Clin Exp Immunol, 2003

8

9 Avaliação da Virulência Modelos Cultura de Células Macrófago Murino – - Zhang et al., 1998 Macrófagos Humanos - Zhang et al., 1998

10 Tempo (Dias) CFU (log) ` H37Rv H37Ra Pulmão / Baço Modelo Animal CFU (log)

11 M Infectados Lise. Acréscimo de RPMI-10% SHA. Incubação 14 dias Sonicação. Diluição Seriada. Inoculação (Middlebrook 7H10). Incubação 37 C / 21 dias. Quantificação CFU IMI = CFU Dia 14 CFU Dia 0 Placa - Dia 0 Placa - Dia 14 PBMC M 7 dias Lavagens M (24 hs) M ETODOLOGIA Zhang et al., 1998

12 E STRATÉGIA E XPERIMENTAL Estudo sobre infecção e adoecimento entre contactantes domiciliares de casos de tuberculose pulmonar (Teixeira et al, 1998) 43 cepas Mtb RFLP Informações: Clínicas Epidemiológicas Laboratoriais Resistentes a drogas, isoladas de casos índices que causaram doença em seus contatos (n = 5) Resistentes a drogas, isoladas de casos índices que NÃO causaram doença em seus contatos (n = 5) Sensíveis a drogas, isoladas de casos índices que causaram doença em seus contatos (n = 6) Sensíveis a drogas, isoladas de casos índices que NÃO causaram doença em seus contatos (n = 6) XX X Prodecimentos: Identificação Det. CIM Aliquotas -70 C

13 Grupos de cepas selecionadas CI Contato

14 H37Ra H37Rv Subtipo GenéticoNo Ensaios Sub Grupos ( IMI )

15 H37Ra H37Rv Subtipo GenéticoNo Ensaios Sub Grupos ( IMI )

16 Cepas de M. tuberculosis detectadas no estudo com perfis genéticos semelhantes Os números indicam os subtipos 3, 4, 5 e 13 e SP indica o subtipo genético predominante no estado de São Paulo CR SP 13 HAARLEM RFLP ContatoCI

17 entre grupos Comparação entre os índices de multiplicação intracelular dos 4 grupos de cepas de M. tuberculosis Analise de variância - ANOVA

18 Resistentes a drogas, isoladas de casos índices que causaram doença em seus contatos (n = 5) Resistentes a drogas, isoladas de casos índices que NÃO causaram doença em seus contatos (n = 5) Sensíveis a drogas, isoladas de casos índices que causaram doença em seus contatos (n = 6) Sensíveis a drogas, isoladas de casos índices que NÃO causaram doença em seus contatos (n = 6) X Harlem = 3 LAM = 1 LAM = 2 Harlem =1 LAM = 3 LAM = 2 Spoligotyping das Cepas de acordo com os grupos

19 entre Comparação entre os subtipos genéticos do M. tuberculosis sensíveis e resistentes as drogas quanto a capacidade de multiplicação intracelular Analise de variância - ANOVA

20 Correlação Entre o Índice de Multiplicação Intracelular e a Resistência a Drogas Anti-Tuberculose dos Subtipos Genéticos do M. tuberculosis Subtipo Genético Coeficiente p- valor IMI 4 0, ,175 0, ,311 0, <2 0,105 0,773 CIM INHRMPSM codon 315 Codon 315 WT KatG

21 NDI-UFES Solange A. Vinhas Tatiana R. Có Fabíola K.C. Ribeiro Renata L. Peres Luciléia Teixeira Reynaldo Dietze Lucilaine Ferrazoli - IAL Tânia M.A.D. Zucchi - ICB/USP Elis R. Dalla Costa - FEPPS


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