Análise da Capacidade de Multiplicação de Genotipos do M

Apresentação em tema: "Análise da Capacidade de Multiplicação de Genotipos do M"— Transcrição da apresentação:

1 Análise da Capacidade de Multiplicação de Genotipos do M
Análise da Capacidade de Multiplicação de Genotipos do M. tuberculosis em Macrófagos Humanos Moisés Palaci

2 Virulência IFN- TNF- Th1 Th1 CD8 Mtb Opsonização Vitamina D3
Genes IFN- Th1 CD8 CR1/CR3/CR4 RPS-A Scavenger receptor CD 14 MMR TLR2/TLR4 Lisossomos LAM ETZ ST Hemolisina Ions regulating factors Mtb Citoplasma O2- NADPH NO NO2- NO3- Arginina H2O2- OH 1O2- NOS2 NO SOD Opsonização pH  Citrulina O2- NH4 noxR1 ahpC noxR3 katG rpoV GL ST LAM

3 Tuberculose Aspectos Patológicos n x V x H Formula de Rich D =
Coroa de linfócitos / histiócitos Lesões cavitárias Céls. epitelióides Célula de Langhans Lesões nodulares caseificadas n x V x H Formula de Rich D = I in x I ad Necrose caseosa

4 Cepas de M. tuberculosis com Elevada Capacidade de Disseminação (Anos 90)
C - Strain Friedman et al, 1997 W - Strain (MDR) Frieden et al, 1996 NY Estados Unidos da América CDC1551 Valway et al, 1998 KY/TN 210 - Strain Barnes et al, 1997 LA

5 Diversidade Genética de Mycobacterium tuberculosis por RFLP
Beijing Haarlem LAM Beijing, EAI LAM; Haarlem LAM; Beijing

6 A Resistência à Drogas Interfere na Virulência do Mtb?
SIM Não Estudos Epidemiológicos . Narain et al, (India) . Devadatta et al, (India) . Siminel et al, (Romênia) Estudos Epidemiológicos . Snider et al, 1985 . Teixeira et al, 2001 (Brasil) Estudos Experimentais . Mitchison et al, 1953 . Magarão, 1956 . Daddi, 1994 Estudos Experimentais Ordway et al, 1995

7 Avaliação da Virulência
Modelos Epidemiológicos Capacidade de: infectar / causar doença / disseminar Friedman et al, J Infect Dis, 1997 Valway et al. N Engl J Med, 1998 Modelos Animais López et al, Clin Exp Immunol, 2003

8

9 Avaliação da Virulência
Modelos Cultura de Células Macrófago Murino – Macrófagos Humanos - Zhang et al., 1998

10 Modelo Animal Pulmão / Baço `2 3 4 5 6 7 H37Rv CFU (log) CFU (log)
` CFU (log) CFU (log) H37Ra Tempo (Dias)

11 METODOLOGIA Zhang et al., 1998 PBMC M 7 dias M Infectados
Placa - Dia 14 Placa - Dia 0 Lavagens M (24 hs) Lavagens M (24 hs) . Acréscimo de RPMI-10% SHA . Incubação 14 dias Lise Sonicação . Diluição Seriada . Inoculação (Middlebrook 7H10) . Incubação 37 C / 21 dias . Quantificação CFU CFU Dia 14 IMI = CFU Dia 0

12 X ESTRATÉGIA EXPERIMENTAL X X
Estudo sobre infecção e adoecimento entre contactantes domiciliares de casos de tuberculose pulmonar (Teixeira et al, 1998) Prodecimentos: Identificação Det. CIM Aliquotas -70 C Informações: Clínicas Epidemiológicas Laboratoriais 43 cepas Mtb RFLP Resistentes a drogas, isoladas de casos índices que causaram doença em seus contatos (n = 5) Sensíveis a drogas, isoladas de casos índices que causaram doença em seus contatos (n = 6) X X X Resistentes a drogas, isoladas de casos índices que NÃO causaram doença em seus contatos (n = 5) Sensíveis a drogas, isoladas de casos índices que NÃO causaram doença em seus contatos (n = 6)

13 Grupos de cepas selecionadas
CI Contato

14 Subtipo Genético No Ensaios Sub Grupos ( IMI ) 1 2 3 4 H37Ra 21 8 10
H37Ra 21 8 10 22 16 5 18 23 9 19 14 H37Rv 2 4 20 11 7 24 15 17 1 3 13 6 10 4 12 14 38 81 86 240 267 282 322 410 489 524 581 615 644 820 920 955 1070 1123 1260 1361 2416 3830 3996 5174

15 Subtipo Genético No Ensaios Sub Grupos ( IMI ) 1 2 3 4 H37Ra 21 8 10
H37Ra 21 8 10 22 16 5 18 23 9 19 14 H37Rv 2 4 20 11 7 24 15 17 1 3 13 6 10 4 12 14 38 81 86 240 267 282 322 410 489 524 581 615 644 820 920 955 1070 1123 1260 1361 2416 3830 3996 5174

16 Cepas de M. tuberculosis detectadas no estudo com perfis genéticos semelhantes
RFLP CR SP 13 HAARLEM CI Contato Os números indicam os subtipos 3, 4, 5 e 13 e SP indica o subtipo genético predominante no estado de São Paulo

17 Comparação entre os índices de multiplicação intracelular dos 4 grupos de cepas de M. tuberculosis
Analise de variância - ANOVA

18 Spoligotyping das Cepas de acordo com os grupos
Resistentes a drogas, isoladas de casos índices que causaram doença em seus contatos (n = 5) Sensíveis a drogas, isoladas de casos índices que causaram doença em seus contatos (n = 6) Harlem = 3 LAM = 1 Harlem =1 LAM = 3 X Resistentes a drogas, isoladas de casos índices que NÃO causaram doença em seus contatos (n = 5) Sensíveis a drogas, isoladas de casos índices que NÃO causaram doença em seus contatos (n = 6) LAM = 2 LAM = 2

19 Comparação entre os subtipos genéticos do M
Comparação entre os subtipos genéticos do M. tuberculosis sensíveis e resistentes as drogas quanto a capacidade de multiplicação intracelular Analise de variância - ANOVA

20 CIM Subtipo Genético IMI KatG INH RMP SM 5 4 3 1 2 7 9 10 11 8 322 920
Correlação Entre o Índice de Multiplicação Intracelular e a Resistência a Drogas Anti-Tuberculose dos Subtipos Genéticos do M. tuberculosis CIM Subtipo Genético IMI KatG INH RMP SM 5 4 3 1 2 7 9 10 11 8 Coeficiente p- valor 322 920 3995 3830 820 1123 524 239 1070 86 codon 315 Codon 315 WT 4 0,25 8 16 64 -0,175 0,630 32 2 128 8 64 -0,311 0,381 128 8 <2 0,105 0,773

21 NDI-UFES Solange A. Vinhas Tatiana R. Có Fabíola K.C. Ribeiro Renata L. Peres Luciléia Teixeira Reynaldo Dietze Lucilaine Ferrazoli - IAL Tânia M.A.D. Zucchi ICB/USP Elis R. Dalla Costa - FEPPS