Aplicação de bombas osmóticas intra-peritoneais:

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1 Aplicação de bombas osmóticas intra-peritoneais:
Estudo do efeito de endotoxina na microestrutura da glândula supra-renal do rato

2 Estudos experimentais com a glândula supra-renal
Estudos in vitro Estudos in vivo Estudo de células e tecidos integrados no organismo

3 Administração de substâncias a estudar
Vias de administração aguda: intra-peritoneal intra-muscular sub-cutânea endovenosa per os (oral) Vias de administração crónica: Normalmente as mesmas, excepto a endovenosa. É comum o uso de bombas osmóticas que são uma forma de administração intra-peritoneal.

4 Bombas osmóticas As bombas osmóticas são pequenos reservatórios implantáveis usados para a pesquisa em ratos e outros animais. Estas bombas de infusão libertam continuamente drogas, hormonas, fármacos e outros agentes cujos efeitos se pretendam testar. A libertação ocorre em taxas controladas, sem necessidade de repetidas manipulações e de um controlo constante da quantidade de substância a administrar.

5 Bombas osmóticas

6 Porquê usar ratos nos estudos?
Mamífero de pequeno porte Metabolismo semelhante ao humano Resistência elevada Rápida procriação Genoma bem conhecido e manipulável (ratos knock-out) 40% da sequência genómica conhecida é semelhante à humana

7 Objectivos do trabalho
Adquirir prática de manuseio de animais de experiência Estabelecer um problema e organizar um método de abordagem para o resolver. Conhecer técnicas e procedimentos usados frequentemente em animais de laboratório (anestésicos e cirúrgicos entre outros) e aplicá-los na resolução do problema. Estabelecer hipóteses que visem explicar os resultados encontrados.

8 Objectivos do trabalho
Estabelecer um problema e organizar um método de abordagem para o resolver. A GSR está envolvida nos mecanismos de resposta ao stress. Que alterações estruturais nela provoca um estímulo stressante como é a endotoxina (ETX) da E. coli ?

9 Material e Métodos Conhecer técnicas e procedimentos usados frequentemente em animais de laboratório (anestésicos e cirúrgicos entre outros) e aplicá-los na resolução do problema. Ratos machos Wistar pesando ~300g divididos em 2 grupos. Ao primeiro, administrou-se endotoxina de E.coli 0127:B8 i.p. por bomba osmótica na dose de 12 μg/h durante 7 dias. Ao segundo, administrou-se volume igual de SF.

10 Material e Métodos Anestesia para colocação das bombas osmóticas:
Indução com sevoflurano a 5% em mistura de O2 a 40%. Manutenção com sevoflurano a 2-3% na mesma mistura.

11 Material e Métodos Técnicas cirúrgicas: Laparotomia mediana por planos
Introdução de bomba osmótica na cavidade peritoneal Encerramento da parede Ao fim de 7 dias, sacrifício do animal e colheita de GSR para morfologia conforme já referido

12 Resultados Na data do sacrifício, os animais de ambos os grupos encontravam-se em boa condição física aparente. Em relação aos controles, os animais do grupo ETX tinham perdido peso. A sua cavidade peritoneal possuía fluido evidente. Nos controles, a extremidade da bomba estava rodeada por uma brida peritoneal; nos do grupo ETX havia diversas bridas a rodear a bomba às quais estavam aderentes ansas intestinais.

13 Resultados Animais controle Tecnicas de microscopia?

14 Resultados Tecnicas de microscopia?
Animais administrados com endotoxina: era aparente um aumento de macrófagos no tecido e um aumento de corpos densos (lisossomas) nas células parenquimatosas

15 Conclusões A anestesia com sevoflurano é simples e rápida. A administração de endotoxina por bomba osmótica é um procedimento tecnicamente fácil A dose empregue provoca alterações peritoneais semelhantes às das doenças infecciosas Os dados morfológicos até agora obtidos, sugerem a activação de processos inflamatórios e de lise celular no córtex SR dos animais tratados com ETX.

16 Bibliografia Alberts B., Bray D., Lewis J., Raff M., Roberts K., Watson J.D Molecular Biology of the Cell 4th edition Garland Science Almeida, H. Rat Genomics IBMCNews Year 8 nºIII IBMC/INEB Munford R. S., Andersen J. M., Dietschy J. M Sites of Tissue Binding and Uptake In Vivo of Bacterial Lipopolysaccharide-High Density Lipoprotein Complexes J. Clin. Invest. 58: Arnold et al Energy balance and brown adipose tissue thermogenesis during chronic endotoxemia in rats. J Appl Physiol 66:

17 Michel