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Técnicas de microscopia de contraste Técnicas de microscopia de contraste 1.Fluorescência; 2.Luz polarizada; 3.Contraste de fase; 4.Campo escuro; 5.Contraste.

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1 Técnicas de microscopia de contraste Técnicas de microscopia de contraste 1.Fluorescência; 2.Luz polarizada; 3.Contraste de fase; 4.Campo escuro; 5.Contraste interferencial. Contraste : interações luz e matéria Em amostras que dão contraste de até 3%, estas técnicas melhoram o contraste, permitindo a visualização pelo olho humano.

2 Reações com a luz Reações com a luz LUZ absorção Transmissão = luz + fluorescência – (absorção + refração + reflexão) reflexão fluorescência refração Contraste : interações luz e matéria

3 Reações com a luz Espectro de luz visível (quanto maior o, menor a energia) Espectro de luz visível (quanto maior o, menor a energia) Contraste : interações luz e matéria

4 i r AR TECIDO AR TECIDO 1ª interação ao entrar no tecido 1ª interação ao entrar no tecido 2ª interação: dentro do tecido dentro do tecido i AR TECIDO e/ou e/ou = menor intensidade de luz transmitida = menor intensidade de luz transmitida

5 Quais interações resultam nesta imagem? Contraste : interações luz e matéria

6 y x 1, Vetor campo elétrico E Onda Polarização é a natureza vetorial da luzPolarização é a natureza vetorial da luz Propriedades fundamentais da luzPropriedades fundamentais da luz - intensidade;- freqüência; - coerência;- polarização. 4

7 Contraste: tipos de amostraContraste: tipos de amostra 1) Amplitude: alteram a intensidade da luz transmitida. Amostras transparentes coradas causam o mesmo efeito. 2) Fase: não absorvem luz, mas causam mudança de fase nos comprimentos de onda que a atravessam. Amostra transparente Amostra tipo amplitude Amostra tipo fase Amostra tipo misto (maioria) Contraste : interações luz e matéria

8 Sem retardo de fase: amplitude aumentada Retardo de fase de 90º: amplitude reduzida Retardo de fase de 180º: amplitude zero Onda A Onda B Resultante Onda A Onda B Resultante Onda A Onda B Resultante Interferência construtiva Interferência destrutiva

9 Reações com a luz Tipos de reflexão Tipos de reflexão regular difusa Contraste : interações luz e matéria

10 Reações com a luz - reflexão regular; - transmissão; - absorção Contraste : interações luz e matéria

11 Reações com a luz - reflexão regular; - pouca transmissão; - absorção. Contraste : interações luz e matéria

12 Reações com a luz - reflexão regular; - transmissão; - absorção. Contraste : interações luz e matéria

13 Reações com a luz Tipos de reflexão Tipos de reflexão Difusa Regular Contraste : interações luz e matéria

14 Reações com a luz Transmissão Transmissão Contraste : interações luz e matéria

15 Reflexão Reflexão Contraste : interações luz e matéria

16 Reações com a luz Reflexão e Transmissão Reflexão e Transmissão Contraste : interações luz e matéria

17 Reações com a luz Na face oclusal Contraste : interações luz e matéria

18 Reações com a luz Fluorescência Aminoácidos fluorescentes - Tirosina; - Fenilalanina; - Triptofano. excit 275 nm260 nm295 nm excit 275 nm260 nm295 nm emiss 304 nm282 nm353 nm emiss 304 nm282 nm353 nm Compostos aromáticos fluorescentes -porfirinas (sangue, pigmentos naturais, bactérias). excit nm excit nm emiss 615 nme 675 nm emiss 615 nme 675 nm Contraste : interações luz e matéria

19 Fluorescências dos tecidos dentais duros excit ótimaemiss máxcromóforo Dentina# 380 nm440 nm? Esmalte# 280 nm420 nmditirosina Cálculo dental* 407 nm604 e 656 nmhematoporfirina dicátion 416 nm617 e 669 nm 431 nm635 e 683 nm # Zijp, Optical propeties of hard dentasl tissues, Thesis, 2001; * Reis et al., Applied Spectr. 2001; Contraste : interações luz e matéria

20 Fluorescências dos tecidos dentais duros Observar comportamento Gaussiano das curvas de fluorescência Contraste : interações luz e matéria

21 Reações com a luz Fluorescência Contraste : interações luz e matéria


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