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Extensive Association of Functionally and Cytotopically Related mRNAs with Puf Family RNA-Binding Proteins in Yeast André P. Gerber, Daniel Herschlag,

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Apresentação em tema: "Extensive Association of Functionally and Cytotopically Related mRNAs with Puf Family RNA-Binding Proteins in Yeast André P. Gerber, Daniel Herschlag,"— Transcrição da apresentação:

1 Extensive Association of Functionally and Cytotopically Related mRNAs with Puf Family RNA-Binding Proteins in Yeast André P. Gerber, Daniel Herschlag, Patrick O.Brow Plos Biology - March 2004

2 Introdução Dinâmica celular: síntese e localização das macromoléculas Fatores de transcrição: regulam o início da transcrição ao se ligar a seqüências de DNA próximas aos genes que serão regulados E a regulação Pós -transcrição?

3 §RNA-binding proteins - RPBs participam dos processos pós transcrição. §Há centenas de RPBs em genomas de eucariotos; mas poucos possuem o RNA alvo identificado.

4 §Pumilio -Fem-3-binding factor (Puf) : RPB citoplasmática de Saccharomyces cerevisae §Puf: proteínas que apresentam seqüências repetitivas de domínios Pumilio §Saccharomyces cerevisae : 5 proteínas Puf. Puf1 a Puf5 que podem apresentar de 6 a 8 seqüências repetitivas.

5 Identificação de mRNAs associados com RBPs específicas §As proteinas A-tagged Puf foram capturadas com Ig-G Sepharos e separadas por clivagem com TEV protease §Os RNAs associados à proteinas foram isolados §Duas amostras foram utilizadas na análise: RNA total e RNA isolado por afinidade ao PUF e foi preparado o cDNA §Cópias c DNA foram titulados por fluorescência e DNA microarrays de levedura

6 Figura 1

7 Seleção dos alvos das PUFs : § Seleção das seqüências enriquecidas com fatores correspondentes aos isolados por afinidade que estavam pelo menos a dois desvios padrões acima da outras seqüências. §Diferentes mRNA = diferentes Pufs §A identificação das PUFs e seus alvos confirmaram as funções das interações RNA - proteina §A lista de RNAs alvos também não foi alterada após análise estatística

8 Definição dos RNAs alvos das PUFs

9 §Em S. cerevisiae : apenas 2 mRNA foram identificados para as proteínas PUF. §Puf3 : COX mRNA 3-UTR (in vitro) §Puf5p : regulam negativamente a expressão de genes repórteres, substituindo o HO de endonucleases

10 Alterações nos genes PUFs de Saccharomyces cerevisiae § PUF4 e PUF5: diminuição da longevidade, §PUF1: supressor de mutação em microtúbulos §PUF2 null: aumento de resistência a cycloheximide e paramomycin §PUFs ausentes: células viáveis

11 Puf1p e Puf2p § 18 % dos genes codificam proteínas associadas à membrana em Sc §A maior parte dos Pufps 1 e 2 associam- se a mRNAs para proteínas associadas à membrana § Proteínas associadas à membrana: funções de transporte transmembrana e transporte vesicular de protínas.

12 Puf3p Puf1p e Puf2p §Está associado à produtos gênicos mitocondrias. §80% biossíntese de proteínas que apresenta função estruturais em ribossomos. §Entre 22 Pufps associadas a mRNAs transcritos de mitocondrias ; 17 estão envolvidos na respiração e 12 na translocação mitocondrial.

13 Puf4p § Associa-se a mRNA envolvidos na síntese, processamento e maturação dos ribossomos - nucléolo

14 Puf5p § §Puf5p : Liga-se a frações de mRNA que codificam proteínas que participam da modificação covalente de histonas. §Puf5p: Liga-se a frações que codificam proteínas envolvidas na regulação da mitose.

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17 §Conclusões §A ligação das RBPs ( Pufp) a mRNA permite maior flexibilidade regulatória que o operon. §As RBPs demonstraram a possibilidade de se regular especificamente o local, a tradução e a sobrevivência do RNAm. §Muitos dos RNAs que ligam -se a RBPs codificam proteínas que são ativas em locais celulares específicos, que formam complexos e participam de vias celulares.

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