Faculdade de Biomedicina Disciplina de Instrumentação Laboratorial

Apresentação em tema: "Faculdade de Biomedicina Disciplina de Instrumentação Laboratorial"— Transcrição da apresentação:

1 Faculdade de Biomedicina Disciplina de Instrumentação Laboratorial
Eletroforese Faculdade de Biomedicina Disciplina de Instrumentação Laboratorial

2 Definição: Separação de moléculas em um campo elétrico de acordo com o tamanho, forma ou a carga elétrica. Tem aplicações nas áreas de análises clínicas, moleculares e genéticas.

3

4 Aplicações da eletroforese
1 – detectar a presença de um gene no DNA de um indivíduo 2 – testes de paternidade 3 – diagnóstico de anemias (exemplo: anemia falciforme) 4 – diagnóstico de deficiências de anticorpos (imunoglobulinas) 5 – controle da qualidade do DNA e RNA que serão analisados

5 Etapas da eletroforese
Extração e purificação do material; Aplicação do material em um suporte: gel de agarose, acrilamida, acetato de celulose; Imersão deste suporte em uma solução tampão que permita a transmissão da corrente elétrica; Aplicação da corrente elétrica em intensidade e tempo adequados, Visualização dos resultados.

6 Cuba e fonte para eletroforese

7 Tipos de gel: Agarose Usados para separar moléculas de DNA e RNA de acordo com seu tamanho. Podem ser usadas diferentes concentrações de agarose. Normalmente utiliza-se a 2%

8 Eletroforese de DNA

9 Tipos de gel: Poliacrilamida
Usados para separar pedaços de DNA de tamanhos muito pequenos e proteínas.

10

11 Acetato de celulose Utilizado para separar diferentes tipos de hemoglobinas de acordo com sua carga elétrica.

12 Esquema da eletroforese de hemoglobina

13 Corrente elétrica As amostras de DNA, RNA e proteína migram para o pólo positivo, pois são carregadas negativamente. Certifique-se da posição do gel e a direção da eletroforese!

14 Tampão de corrida Para amostras de DNA e RNA o tampão deve ser o mesmo utilizado para diluir a agarose (TAE ou TBE). Para amostras de hemoglobina utiliza-se o tampão Tris em pH 8,5 (alcalino) ou tampão agarose pH 6,5 (ácido).

15 Análise dos resultados
A visualização das diferentes bandas depende de coloração específica. DNA e RNA = brometo de etídeo ou SYBR green Proteínas = azul de coomassie e prata

16

17 DNA e RNA Marcadores de tamanho para DNA e RNA

18 DNA corado com SYBR green
Marcador de tamanho (100 pares de base)

19 Proteínas