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PublicouThamilis Thami Alterado mais de 7 anos atrás
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Thamilis J. Menezes
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GENÔMICA NOVOS CONCEITOS MARCADOR MOLECULAR CHIP DE SNP SELEÇÃO GENÔMICA VIÁVEL EFICAZ PRODUÇÃO Melhoramento Genético
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O que são marcadores?
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Qualquer característica morfológica ou molecular que diferencia indivíduos, e que seja facilmente detectável. Morfológicos Bioquímicos DNA Marcadores Genéticos
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Os marcadores moleculares são variações no genoma que podem caracterizar as diferenças genéticas entre dois ou mais indivíduos e são analisados com auxílio de diferentes metodologias de biologia molecular. Bioquímicos DNA Marcadores moleculares
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É um fenótipo de fácil identificação, normalmente determinado por um único alelo. Morfológicos Características fenotípicas são utilizadas como marcadores morfológicos desde os tempos de Mendel, como fenótipos de fácil identificação visual.
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Baseado na propriedade de migração das proteínas, as quais podem ser separadas por eletroforese; Bioquímicos
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Polimorfismo detectado na sequência de DNA Vantagens: - Não é objeto de influências ambientais; - Potencialmente ilimitado em número; Maior desvantagem é a necessidade de técnicas e equipamentos mais complexos. Marcadores de DNA
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Alto polimorfismo Não sofrem influencia do meio Geralmente são codominantes Analisados em qualquer estágio do indivíduo Caracterizam um indivíduo a partir de células ou tecidos Vantagens dos Marcadores
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Métodos de extração de DNA Ausência de polimorfismo Escolha da técnica Poucos Linkage maps Custo das técnicas Limitações
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Uso de Marcadores moleculares como parâmetro de seleção em programas tradicionais de melhoramento Seleção Assistida por Marcadores - MAS
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*PCR RFLP STRs SNP Como são detectados
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Mullis, 1983 Replicação do DNA in vitro *PCR ( POLIMERASE CHAIN REACTION )
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Desnaturação - abertura da fita dupla de DNA devido a temperatura de 92ºC a 95ºC. Emparelhamento - temperatura é reduzida rapidamente para 35ºC a 60ºC,permitindo a hibridação da primeira fita de DNA. Extensão - a temperatura é elevada para 72ºC para que a enzima DNA polimerase realize a extensão adicionando nucleotídeos. Etapas do PCR
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Baseado em Hibridação Elevado grau de polimorfismo Heritabilidade codominante Preço elevado Reprodutibilidade elevada RFLP ( RESTRICTION FRAGMENT LENGHT POLIMORPHISM )
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Extração de DNA Corte da fita dupla de DNA com enzimas de Restrição Gel agarose (neste gel não se pode ver as bandas separadamente, por serem muitas) Passagem das bandas para membrana de nitrocelulose por capilaridade Fixação das bandas de DNA na membrana Hibridização da sonda aos fragmentos complementares de DNA Exposição das sondas a um filme de raio X num processo chamado auto radiografia, revelando as bandas de DNA. Etapas do RFLP
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Locos RFLP estudado em populações segregantes
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Variação do PCR Utiliza um par de primers específicos Amplifica segmentos curtos Microssatélites ou STRs
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Baseado em PCR Polimorfismo muito elevado Heritabilidade codominante Preço elevado Reprodutibilidade elevada Grande número de indivíduos e marcadores Microssatélites ou STRs
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Extração de DNA Quantificação de DNA extraído Padronização da concentração de DNA para PCR Reação de PCR Eletroforese Coloração com brometo de etídio e visualização das bandas Etapas
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Mutações – substituições, deleções e adições de nucleotídeos Encontrados facilmente em qualquer região do genoma Dialélicos – pouca informação por locos SNP ( SINGLE NUCLEOTIDE POLIMORPHISM )
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SNPs são as mais frequentes formas de variações genéticas 90% das variações genéticas humanas vêm dos SNPs SNPs ocorrem a cada 300~600 nucleotídeos SNPs tem se tornado marcadores de preferência pela sua grande abundância e pelo desenvolvimento de tecnologias de genotipagem em larga escala.
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SNPs são alterações no DNA que se mantém nas gerações futuras – SNP: variação >1% – Mutação: variação <1%
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Polimorfismo do bGH O gene LEP Gene da calpaína Gene CAST Genes de Interesse Econômico
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