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Replicação do DNA & Transposons
Enzimas e Mecanismos Envolvidos na Replicação e Transposição do DNA Prof. Henrique S. Costa, M.Sc.
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Replicação do DNA e ciclo celular
Replicação e Ciclo Celular estão intimamente conectados. A freqüência do ciclo de replicação deve ajustar-se a velocidade de crescimento da célula. O término da replicação necessita ajustar-se à divisão celular. Sinais celulares para o crescimento e divisão celular → síntese de proteínas, falta de aminoácidos, ligação entre DNA e membrana celular (mesossomo) etc. # No processo de divisão celular, os cromossomos precisam estar completos. # A célula têm de possuir um tamanho celular mínimo necessário.
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Replicação do DNA e ciclo celular
PROCARIOTOS # E. coli → 20 minutos (formação de novas gerações) # Ponto-chave na relação entre replicação e ciclo celular → momento em que o processo de duplicação do cromossomo deve ser iniciado. # O ciclo de replicação deve ocorrer bem antes do processo de divisão celular. # Presença de cromossomos com várias forquilhas de replicação em diferentes estágios de desenvolvimento.
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Replicação do DNA e ciclo celular
PROCARIOTOS EUCARIOTOS
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Replicação do DNA e ciclo celular
PROCARIOTOS # Pontos-chave na relação entre replicação e ciclo celular → momento em que o processo de duplicação do cromossomo deve ser iniciado. → ligação física entre DNA e membrana celular. # Origem de replicação → seqüências GATC (sítios de metilação da Adenina). Metilação → adição do radical metil (– CH3) na base nitrogenada tornando o DNA susceptível ao início da replicação. → metilases (EcoR1 e BamH1)
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Procarioto → E. coli
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Replicação do DNA e ciclo celular
PROCARIOTOS # Origem de replicação → formação de DNA hemi-metilado (nova fita sintetizada) que se liga a membrana celular (mesossomo) → segregação de cada cromossomo para cada uma das células após a o processo de divisão celular.
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Replicação em Procarioto
Anel Perisseptal
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Replicação do DNA e ciclo celular
EUCARIOTOS G1 – período variável entre diferentes organismos (iniciam seu ciclo como diplóides). S → iniciação das origens de replicação (ao final, a célula é tetraplóide). G2 → preparação do núcleo para divisão. Mitose → divisão celular (manutenção do número de cromossomos)
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Replicação do DNA e ciclo celular
EUCARIOTOS Duplicação do material genético → ativação das origens de replicação em diferentes tempos. # Sinais celulares para o início da fase S → ativação da primeira origem de replicação.
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Replicação do DNA e ciclo celular
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Origem de replicação Características das regiões de início de replicação → presença de grande quantidade de sítios AT. Vírus, plasmídeos e células procarióticas → possuem apenas uma origem de replicação. # Eucariotos → várias origens de replicação.
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Origem de Replicação
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Origem de Replicação
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Replicação em Procarioto
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Replicação em Procarioto
Complexo inicial → ligação de DNaA (proteína) em seu sítio de ligação (4 seqüências repetidas de 9 pb (5’ TTAT(C/A)CA(C/A)A 3’)). Complexo aberto → dependente das alterações estruturais no DNA em função do complexo DNaA:oriC (separação das 2 fitas na seqüência de 13 pb). HU, IHF (proteínas) estimulam a reação a partir da estabilização da curvatura do DNA. Complexo pré-priming → ligação de DNaB (proteína) na região de 13 pb. Formação do complexo DNaB:DNaC. # DNaB → mantém as 2 fitas de DNA dissociadas, permitindo que a replicação continue (helicase).
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Replicação em Procarioto
Complexo Inicial Complexo Aberto Complexo Pré-priming
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Replicação em Procarioto
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Replicação em Procarioto
Características Proteína Iniciadora Monômero de 52 kDa Liga-se as 4 seqüências de 9pb Ligação Cooperativa 20 a 40 monômeros Liga-se a origem Induz abertura da fita de DNA Posiciona DnaB em oriC Função
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Replicação em Procarioto
DnaB Características Helicase Hexâmero (54 kDa) Liga-se as 3 seqüências de 13pb Ligação Dimerizada DnaB-DnaC Liga-se a origem após DnaA Utiliza ATP Preparo para entrada do P’ Função
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Proteínas e genes envolvidos no início da replicação de E. coli
Replicação em Procarioto Proteínas e genes envolvidos no início da replicação de E. coli Proteína Gene Função DnaA dnaA Reconhecimento de oriC DnaB dnaB Helicase → Ligação na região aberta de 13pb DnaC dnaC Formação do complexo pré-priming DnaG dnaG Primase → Sintetiza e posiciona o primer Girase gyr Remoção de supertorções positivas SSB ssb Estabiliza DNA de fita simples HU hup Estabilização da curvatura do DNA
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Mecanismos de Replicação
Replicação Semiconservativa Replicação Conservativa Replicação Dispersiva
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Mecanismos de Replicação
SEMICONSERVATIVO → as 2 fitas do DNA parental são copiadas, originando moléculas filhas com apenas uma das fitas novas sintetizadas.
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Mecanismos de Replicação
1958: Matthew Meselson e Franklin W. Stahl Marcação do DNA de E. coli 15N Centrifugação de equilíbrio em gradiente de densidade (Cloreto de Césio)
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Mecanismos Básicos
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