INTERAÇÃO ANTÍGENO-ANTICORPO

Apresentação em tema: "INTERAÇÃO ANTÍGENO-ANTICORPO"— Transcrição da apresentação:

1 INTERAÇÃO ANTÍGENO-ANTICORPO
Dayse Locateli 2005

2 Ligações não covalentes:
Pontes de Hidrogênio Ligações iônicas Interações hidrofóbicas Interações de Van der Waals Interação reversível Complementariedade Especificidade

3 Força de interações total entre Ac e Ag.
Afinidade Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um único epítopo). Avidez Força de interações total entre Ac e Ag. Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos Reação cruzada Dois Ag diferentes apresentam um epítopo idêntico Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não relacionado, mas com propriedades químicas similares.

4 Aplicações Pesquisa Diagnóstico Soroepidemiológia Métodos:
Precipitação Aglutinação Imunoensaios

5 Metodologias que utilizam:
Reagentes não marcados Reação de precipitação Reação de aglutinação 2) Reagentes marcados RIA ELISA Imunofluorescência Western Blot

6 Reagentes não marcados
Detectam / quantificam as conseqüências da ligação Ag – Ac

7 Reação de Precipitação
Interação: ac - ag solúvel forma uma rede que pode desenvolver um precipitado visível. Reação de Precipitação Anticorpos bivalentes + Antígenos multivalentes PRECIPITADO

8 1- Reação de precipitação em soluções
Reação quantitativa: Qtidade cte Ac Qtidade cresc. Ag Qtidade precipitina

9 2 - Reação de Precipitação em gel Utiliza uma matriz de ágar
Ag + Ac = linha de precipitação visível a) Imunodifusão radial (Método de Mancini) Ag ou Ac fixos Dosagem de proteínas séricas b) Imunodifusão dupla Identidade de Ags = Ac de reatividade conhecida

10 Reações de Aglutinação
Ac + Ag particulado aglutininas Agregação visível de partículas Efeito pró-zona Eritrócitos Bactérias Fungos látex

11 Aglutinação Direta Células ou partículas insolúveis + Ac = Aglutinação
Detecção Acs específicos Quantificação Tipagem ABO Testes confirmatórios para sífilis Aglutinação bacteriana Presença de infecção Diferenciação de espécies

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13 Aglutinação passiva Ag solúveis associados a outras superfícies +
(Partículas de látex ou superfície de hemácias) +

14 Inibição da Aglutinação

15 Reagentes Marcados Detectam / quantificam diretamente a ligação Ag - Ac

16 Ensaio Imunoadsorvente Ligado à Enzima - ELISA
Ac marcados com Enzimas + Ag + substrato (incolor) = COR Fosfatase alcalina Peroxidase B-galactosidase Qualitativos Quantitativos Direto = Ag Indireto = Ac

17 ELISA Indireto ELISA Direto ou Sanduíche

18 ELISA Competitivo Aplicações do ELISA:
Testes de rotina em Laboratórios Clínicos e de Pesquisa Vantagens: Teste de alta sensibilidade Permite quantificar Ag ou Ac das amostras Seguros e de baixo custo

19 Imunofluorescência

20 Ac + Fluorocromo  luz  Ac + fluorocromo r ght

21 IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA Reagentes secundários: Anticorpo secundário marcado com fluorocromo proteína A marcada com fluorocromo = porção Fc das IgGs

22 Isotiocianato de fluoresceína (FITC) VERDE
Ficoeritrina (FE) VERMELHA

23 Identificar subpopulações de linfócitos
Aplicações: Identificar subpopulações de linfócitos Identificar espécies bacterianas localização de hormônios Detecção complexos ag-ac em doenças auto-imunes Detecção anticorpos anti-DNA Teste qualitativo

24 Citometria de Fluxo Separação de células ativadas por fluorescência
Anticorpos contra moléculas de membrana ou Antígenos do Conjunto de Diferenciação (CD) Cada Ac é marcado com um fluorocromo diferente Teste qualitativo e quantitativo CD 18 CD 4 CD 125 CD 147

25 Tamanho Granulosidade Fluorescência

26 Determinar o tipo e no de céls. sanguíneas brancas
Aplicações: Determinar o tipo e no de céls. sanguíneas brancas isolar populações celulares distribuição de céls de acordo com a densidade dos Ag o tamanho celular. CD4 CD8 CD20 Uso de múltiplos anticorpos fluorescentes HIV , Leucemias

27 Western Blotting Eletroforese de proteínas Diferença de tamanho (PM)
Mobilidade da proteína Detecção Ag ou Ac

28 Western Blotting Gel membrana de transferência papel filtro
preenchimento tela de suporte Gel/ membrana/ filtro Separação e detecção de proteínas Identificação de Ac específico Ac radiomarcado ou Ac sec. ligado a enzima Tampão ( +) ( - )

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30 Radioimunoensaio RIA Hormônio proteínas séricas drogas vitaminas Ac
Moléculas marcadas com ISÓTOPO 0,0001 microgramas/ mL

31 Testes que necessitem de alta sensibilidade
Marcações: I125: emite raios gama H3: raios beta Aplicações: Testes que necessitem de alta sensibilidade Triagem vírus da hepatite B em doadores de sangue Pesquisa Desvantagem: Não é um teste seguro!

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