RESULTADOS AULAS PRÁTICAS

Apresentação em tema: "RESULTADOS AULAS PRÁTICAS"— Transcrição da apresentação:

1 RESULTADOS AULAS PRÁTICAS
UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO CAMPUS DE PIRACICABA Centro de Energia Nuclear na Agricultura Laboratório de Biologia Celular e molecular Disciplina CEN-0333 – Análise Diagnóstica de Organismos Geneticamente Modificados (OGMs) Responsável: Dra. Siu Mui Tsai Ap. Técnico: José Elias Gomes Estagiária: Fabiana S. Cannavan RESULTADOS AULAS PRÁTICAS

2 Materiais usados na aula prática para detecção de OGMs
06/03/2012 Materiais usados na aula prática para detecção de OGMs KIT TRAIT PARA DETECÇÃO DE PROTEINAS Proteína da Agrobacterium tumefasciens em Soja, Canola e Algodão: CP4 EPSPS (RR)

3 Para a credibilidade do teste, todas as fitas devem apresentar a marca, a linha controle, proveniente da proteína (soja e milho), indicando que houve a correta migração das proteínas do extrato pela fita e ligação com seus respectivos anticorpos; Conforme esperado, os grãos geneticamente modificados com o gene CP4 EPSPS nos seus tecidos, indicaram resultado positivo na avaliação das marcas na fita-teste. Nesses casos, as tiras de fluxo lateral fornecidas no Kit indicaram a formação de duas marcas: a primeira referente á proteína, e a segunda, exclusiva dos transgênicos;

4 Grãos de Soja convencional Grãos de Soja transgênica

5 O teste é qualitativo e capaz de detectar amostras com nível de contaminação acima de 1% em apenas 5 minutos. O seu uso é de extrema praticidade, sendo muito importante para rápida detecção de alimentos geneticamente modificados em portos e aeroportos.

6 Para o uso de técnicas moleculares de detecção de OGMs,
a turma foi dividida em grupos Grupo 1 Grupo 2 1 – Grãos Soja Convencional 2 – Grãos Soja Convencional 3 – Grãos Soja Convencional 1A – Leite Soja 2A – Proteina Soja Texturizada (Carne Soja ) 1M – Folha Milho Convencional 2M – Folha Milho Transgênica 4 – Grão Soja convencional 5 – Grãos Soja Convencional 6 – Grãos Soja Convencional 3A – Leite Soja 4A – Proteina Soja Texturizada (Carne Soja ) 3M – Folha Milho Convencional 4M – Folha Milho Transgênica

7 Para o uso de técnicas moleculares de detecção de OGMs,
a turma foi dividida em grupos Grupo 3 Grupo 4 7 – Grãos Soja Convencional 8 – Grãos Soja Convencional 9 – Grãos Soja Convencional 5A – Leite Soja 6A – Proteina Soja Texturizada (Carne Soja ) 5M – Folha Milho Convencional 6M – Folha Milho Transgênica 10 – Grãos Soja Transgênica 11 – Grãos Soja Transgênica 12 – Grãos Soja Transgênica 7A – Leite Soja 8A – Proteina Soja Texturizada (Carne Soja ) 7M – Folha Milho Convencional 8M – Folha Milho Transgênica

8 Para o uso de técnicas moleculares de detecção de OGMs,
a turma foi dividida em grupos Grupo 5 Grupo 6 13 – Grãos Soja Transgênica 14 – Grãos Soja Transgênica 15 – Grãos Soja Transgênica 9A – Leite Soja 10A – Proteina Soja Texturizada (Carne Soja ) 9M – Folha Milho Convencional 10M – Folha Milho Transgênica 16 – Grãos Soja Transgênica 17 – Grãos Soja Transgênica 18 – Grãos Soja Transgênica 11A – Leite Soja 12A – Proteina Soja Texturizada (Carne Soja ) 11M – Folha Milho Convencional 12M – Folha Milho Transgênica

9 13/03/2012 extração do DNA genômico total de grãos de soja – protocolo CTAB de Doyle&Doyle 1990, modificado; 20/03/2012 Extração de DNA utilizando Sistema de Purificação de DNA para Alimento Wizard Magnetic Cat. FF3750 27/03/2012 Extração de DNA de tecidos foliares de milho – protocolo CTAB de Doyle&Doyle 1990, modificado.

10 Quantificação e pureza das amostras de DNA
mensuradas em espectrofotômetro (Nanodrop 1100) 10/04/2012 Amostras - Grupo2 ng/µl 260/280 4 1462.5 1.23 5 3235.5 1.33 6 3817.5 1.34 3A 367.2 1.6 4A 365.6 1.89 3M 948.6 1.96 4M 523.4 Amostras - Grupo1 ng/µl 260/280 1 821.8 1.49 2 1372.2 1.4 3 2035.5 1.36 A1 347.5 1.5 A2 366.8 1.71 1M 618.1 1.96 2M 1451 1.94 Amostras - Grupo4 ng/µl 260/280 10 3761.8 1.33 11 -247.4 1.18 12 1048.6 1.41 7A 766.9 1.71 8A 1346.5 1.79 7M 1744.1 1.96 8M 1191.3 1.97 Amostras - Grupo3 ng/µl 260/280 7 3847.6 1.33 8 3970.5 1.29 9 1977.5 1.36 5A 497 1.65 6A 756 1.73 5M 818.3 1.96 6M 526.8 1.91

11 Quantificação e pureza das amostras de DNA
mensuradas em espectrofotômetro (Nanodrop 1100) 10/04/2012 Amostras - Grupo5 ng/µl 260/280 13 3289.3 1.29 14 4381.2 15 2308.4 9A 722.8 1.61 10A 532.6 1.76 9M 1360 1.96 10M 696.9 1.97 Amostras - Grupo6 ng/µl 260/280 16 3127.4 1.32 17 2765.5 1.3 18 2873.2 1.31 11A 525.4 1.58 12A 482.8 1.86 11M 1266.9 1.97 12M 642.9 1.95 864.3 1.5

12 GRUPO 1 GRUPO 2 10/04/2012 Quantificação do DNA 1 2 3 1A 2A 1M 2M

13 GRUPO 3 GRUPO 4 10/04/2012 Quantificação do DNA 7 8 9 5A 6A 5M 6M 10
11 12 7A 8A 7M 8M

14 GRUPO 5 GRUPO 6 10/04/2012 Quantificação do DNA 13 14 15 9A 10A 9M 10M

15 Grupo 1 PCR - Primer LEC 1 – Soja 0% 2 – Soja 5% 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
3 – Grãos de soja convencional 4 – Grãos de soja convencional 5 – Grãos de soja convencional 6 – Leite processado 7 – Carne processada 8 – Folha de milho convencional 9 – Folha de milho transgênico 10 – Controle Negativo

16 Grupo 2 PCR - Primer RR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 – Soja 0% 2 – Soja 5%
1 – Soja 0% 2 – Soja 5% 3 – Grãos de soja convencional 4 – Grãos de soja convencional 5 – Grãos de soja convencional 6 – Leite processado 7 – Carne processada 8 – Folha de milho convencional 9 – Folha de milho transgênico 10 – Controle Negativo

17 Grupo 3 PCR - Primer 35S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 – Soja 0% 2 – Soja 5%
1 – Soja 0% 2 – Soja 5% 3 – Grãos de soja convencional 4 – Grãos de soja convencional 5 – Grãos de soja convencional 6 – Leite processado 7 – Carne processada 8 – Folha de milho convencional 9 – Folha de milho transgênico 10 – Controle Negativo

18 Grupo 4 PCR - Primer LEC 1 – Soja 0% 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 2 – Soja 5%
3 – Grãos de soja transgênica 4 – Grãos de soja transgênica 5 – Grãos de soja transgênica 6 – Leite processado 7 – Carne processada 8 – Folha de milho convencional 9 – Folha de milho transgênico 10 – Controle Negativo

19 Grupo 5 PCR - Primer RR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 – Soja 0% 2 – Soja 5%
1 – Soja 0% 2 – Soja 5% 3 – Grãos de soja transgênica 4 – Grãos de soja transgênica 5 – Grãos de soja transgênica 6 – Leite processado 7 – Carne processada 8 – Folha de milho convencional 9 – Folha de milho transgênico 10 – Controle Negativo

20 Grupo 6 PCR - Primer 35S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 – Soja 0% 2 – Soja 5%
1 – Soja 0% 2 – Soja 5% 3 – Grãos de soja transgênica 4 – Grãos de soja transgênica 5 – Grãos de soja transgênica 6 – Leite processado 7 – Carne processada 8 – Folha de milho convencional 9 – Folha de milho transgênico 10 – Controle Negativo