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Pesquisa experimental na pós-graduação
Maria Carolina Guido
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Pesquisa experimental
“É o conjunto de procedimentos sistemáticos em animais, baseados no raciocínio lógico, que tem por objetivo encontrar soluções para problemas propostos, mediante a utilização de métodos científicos que normalmente não são reprodutíveis em seres humanos”. Dúvida, problema, questões sem solução, dados importantes para a Ciência Aplicação de uma Metodologia Científica adequada Obtenção de soluções, dados, parâmetros e respostas
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Histórico Aristóteles ( ac) início de dissecção em diferentes animais Erasistratus (304 – 258 ac) experimentação com animais vivos traquéia = tubo aéreo pulmões = órgãos pneumáticos Época medieval proibição pelas autoridades eclesiásticas
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Novo marco experimental
Andreas Vesalius (1500) anatomia X fisiologia vivissecção
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Início da pesquisa experimental
França (1800): primeiro centro experimental biológico e médico
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Delineamento do experimento
Definição da variável a ser estudada e a forma como deve ser mensurada Especificação do tipo de estudo in vivo, in vitro, ex vivo in vivo: tipo de animal Determinação dos grupos experimentais grupo controle grupo sham grupo experimento grupo cego Tipo de tratamento a ser efetuado (?) Grupo piloto X grupo experimental
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Características da pesquisa experimental
Pesquisa que não pode ser desenvolvida em pacientes Proximidade com o modelo humano Baixa variabilidade dos resultados Uniformidade estatística Reprodutibilidade dos resultados
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ANIMAIS EXPERIMENTAIS
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Camundongos Peso macho 20-40g e fêmeas 18-35g Longevidade 1-4 anos
Origem camundongo selvagem (Mus musculus) Geneticistas linhagens isogênicas e heterogênicas (Mus domesticus) Peso macho 20-40g e fêmeas 18-35g Longevidade 1-4 anos Dieta universal comida: 5,0g/dia água: 6,7 mL/dia Pequeno tamanho os tornam extremamente suscetíveis às alterações das condições ambientais (2 a 3ºC)
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Utilização em laboratórios
Tamanho pequeno, fácil de manusear, baixo custo de manutenção, economia de espaço Tempo de vida curto modelo útil para estudos relacionados com idade e toxicologia crônica Alterações genéticas favoráveis (Knock-out) Utilização experimental imunologia (rejeição ou não de transplantes de tecidos) fisiologia e bioquímica (elucidação de processos fisiológicos e bioquímicos) estudos comportamentais microbiologia teratologia avaliação da segurança e eficácia de produtos farmacêuticos
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Exemplos de algumas linhagens
Balb/c Baixa incidência de tumores mamários Suscetíveis à pneumonia crônica Suscetíveis à radiação Usados para produção de anticorpos monoclonais C57BL/6 Podem apresentar hidrocefalia Amplamente utilizados como linhagem padrão para manutenção de muitas mutações Resistentes à radiação Suscetíveis à inoculação do bacilo da tuberculose DBA/2 Apresentam deficiência de vitamina K Resistentes à infecções de Plasmodium e Leihmania
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Ratos Peso macho 300-400g e fêmeas 250-300g Longevidade 4 anos
Origem rato Norway marrom Rattus norvegicus Primeira espécie de mamíferos a ser usada sistemicamente para propósitos científicos (efeito da adrenalina em ratos albinos – França, 1856) Peso macho g e fêmeas g Longevidade 4 anos Dieta universal comida: 100g/dia água: 80 a 110 mL/dia Manipulação início da manhã (digestão)
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Utilização em laboratórios
Grande adaptabilidade modelo adequado para uma variedade de diferentes tipos de pesquisa Utilização experimental endocrinologia bioquímica farmacologia toxicologia fisiologia experimental teratologia Alta tolerância à carência de constituintes de ração nutrição neurofisiologia oncologia imunologia imunogenética parasitologia
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Exemplos de algumas linhagens
Wistar e Sprague-Dawley albino Animais gentis e facilmente manipuláveis SHR Incidência alta de hipertensão (200mmHg), sem lesões nos rins ou glândulas adrenais Lewis albino Alta fertilidade Elevado nível de tiroxina, insulina e hormônio do crescimento Tornam-se obesos com dieta rica em gordura Desenvolvem miocardite F344 Alta incidência de tumores mamários e de adenomas da pituitárias
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Hamster Peso macho 85-130g e fêmeas 95-150g Longevidade 3 anos
Origem Sírio (Mesocricetus auratus) Chinês (Cricetulus griseus) Europeu (Cricetus cricetus) Peso macho g e fêmeas g Longevidade 3 anos Dieta universal comida: 10-12g/dia água: 8-10 mL/dia
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Utilização em laboratórios
Características imunogenéticas que os tornam tolerantes a tumores, parasitas, vírus e bactérias A presença da bolsa na bochechas tornou-se útil para permitir transplantes de tumores (crescimento livre e simetricamente) Estudos de disfunção endócrina e estudos parasitológicos Pesquisa dentária (dente molar é semelhante ao humano)
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Chinês: alta incidência de Diabetis mellitus
Baixo nº cromossômico (22): estudos citológicos (genética, cultura de tecido e radiação) Radioresistentes É o modelo mais seguro para estudo dos efeitos carcinógenos químicos nos rins e nas bexigas Tolerantes a lavagens pulmonares (estudo de inalação) Teratologia (curto período de gestação)
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Cães Origem Canis familiares (Beage, Corgi, Boxer, Labrador e cães de rua) Centros de controle de zoonoses Condições especiais devem ser consideradas desnutrição, desidratados, ecto e endoparasitoses e doenças infecto-contagiosas Utilização experimental Grande semelhança aos seres humanos Choque hemorrágico Técnicas e treinamento de transplantes e microcirurgias Eutanásia deve ser realizada da maneira mais humana possível (pentoparbital sódico, tiro com arma de fogo e eletrocução)
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Preços de animais Camundongo BALB/c (8 semanas) – US$ 12.00
Rato Wistar (60 dias) – US$ 20.00 Camundongo transgênico (4 semanas) – US$ 29.00
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Porcentagem de animais cedidos a alunos de pós-graduação – FMUSP 1998
% 378 1% 12231 – 39% % 2008 – 6% 186 – 1%
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Produção mensal de ratos Wistar FMUSP 1998
Fornecimento total:
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