Princípios Básicos da Oximetria de Alta Resolução UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA Métodos Analíticos em Bioquímica Prof. Alcir Dafré Princípios Básicos da Oximetria de Alta Resolução Paulo Silveira Roberta Martins Orientadora: Alexandra Latini
Respiração Mitocondrial
Substratos para Respiração Mitocondrial
Transporte de Substratos
Inibidores para Respiração Mitocondrial
(Oroborus Instruments) Oxímetro Oxygraph-2k (Oroborus Instruments)
10µl de piruvato + 10 µl de malato 2mM Aula Prática Amostra: Concentrado de Mitocôndrias de Fígado de Ratos Técnica: Reagentes 10µl de piruvato + 10 µl de malato 2mM 25 µl ADP 0,25M 4 µl Rotenona 1mM 20 µl Succinato 5 µl Cianeto
Resultados Aula Prática Reagentes Consumo de Oxigênio (Marks Statistics) 10µl de piruvato + 10 µl de malato 2mM 25 µl ADP 0,25M 4 µl Rotenona 1mM 20 µl Succinato 5 µl Citocromo C
Resultados Aula Prática Estágio III: Quantidade de Oxigênio consumido na presença de substratos e ADP. Estágio IV: Quantidade de Oxigênio consumido após a exaustão dos substratos e ADP. Controle Respiratório (RCR): RCR ADP/Pir+Mal = RCR ADP/Succinato=