UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS CENTRO DE DESENVOLVIMENTO E TECNOLOGIA GRADUAÇÃO EM BIOTECNOLOGIA DISCIPLINA DE ENGENHARIA TECIDUAL PROFESSORA FERNANDA.

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1 UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS CENTRO DE DESENVOLVIMENTO E TECNOLOGIA GRADUAÇÃO EM BIOTECNOLOGIA DISCIPLINA DE ENGENHARIA TECIDUAL PROFESSORA FERNANDA NEDEL CLONAGEM FERNANDO LOPEZ ALVEZ VICTOR FONSECA Pelotas, 2011

2 Clonagem É um processo de reprodução assexuada que resulta na obtenção de cópias geneticamente idênticas de um mesmo ser vivo. Microorganismo, vegetal ou animal.

3 Clonagem Natural Induzida

4 Clonagem Natural

5 Clonagem Induzida: Celular (Terapêutica) Reprodutiva (Organismos)

6 Clonagem Induzida

7 Clonagem Induzida Terapêutica Técnica de SCNT;
Isolamento das células no estágio de blastocisto; Cultivo das células tronco embrionárias; Utilização: Desenvolvimento de estudos humanos; Tratamento de doenças.

8 Clonagem Induzida Terapêutica Blastocisto Humano
Colônia de células tronco embrionárias de humano, em feeder layer de fibroblasto embrionário de camundongo Blastocisto Humano

9 Clonagem Induzida Reprodutiva SCNT; Eletrofusão; Formação do embrião;
TE (Transferência de Embrião); Taxa de nascimento 2,5%; Bipartição de embrião (estágio 6-8 células).

10 Clonagem Reprodutiva

11 Clonagem Reprodutiva Dolly
Primeiro mamífero clonado a partir de uma célula adulta; Roslin Institute – Escócia; Importância na reprogramação; 237 oócitos – 29 embriões – 3 cordeiros – Dolly; DNA mitocondrial (incompatibilidade); Telômeros; Morte da Dolly devido à infecção respiratória.

12 Clonagem Reprodutiva Dolly

13 Lista de Animais Clonados
Clonagem Reprodutiva Lista de Animais Clonados Girino 1952 Carpa 1963 Camundongo 1986 Ovelha 1996 Macaco Rhesus 2000 Gaur (Boi Selvagem) 2001 Vaca 2001 / 2005 (Brasil) Gato Rato 2003 Mula Égua Cão 2005 Búfalo 2009 Camelo

14 Reprogramação A célula doadora deve adotar os parametros de ciclo celular de um zigoto, como: Replicação do DNA; Condensação cromossômica; Padrões embriônicos de replicação e transcrição de DNA.

15 Fatores que afetam reprogramação
Sincronia do ciclo celular da célula doadora com as celulas receptoras. Origem tecidual da célula doadora, o número de passgens e as condições do meio de cultura. Transferência de células com baixo nível de marcadores epigenéticos. Modificando marcadores epigenéticos com drogas. Trichostatina A (TSA) é um composto orgânico que inibir seletivamente as deacetilases I e II de histonas mamíferas (HDAC).

16 Serum starvation Diminuição de soro no meio de cultura – ou sua ausência – induzem quiescência das células e obriga elas a pararem no estágio de G0. Alguns autores discutem a necessidade de indução para G0, pois células em estpagio G1 produziram animais.

17 Tipos de células doadoras
Células epiteliais mamárias; Células do cumulus; Fibroblasto da pele e outros tecidos; Células de Sertoli. Todavia não há um consenso de qual seria a célula doadora ideal para realizar-se a técnica.

18 Efeito de passagens Células que sofreram passagens – até 15 – puderam ser utilizadas para produção de clones. Células de fetos ou animais jovens são mais eficientes para transferência nuclear.

19 Benefícios Produção de transgênicos;
Proteção de espécies ameaçadas de extinção; Produção de tecidos para xenotransplante.

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24 Obrigado.