Reação antígeno-anticorpo aplicada à Imunologia eritrocitária

Apresentação em tema: "Reação antígeno-anticorpo aplicada à Imunologia eritrocitária"— Transcrição da apresentação:

1 Reação antígeno-anticorpo aplicada à Imunologia eritrocitária
Prof. Dr. Luiz Carlos de Mattos Laboratório de Imunogenética Molecular Hemocentro de São José do Rio Preto Departamento de Biologia Molecular Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto

2 Reação antígeno-anticorpo Características das interações antígeno-anticorpo
Especificidade: determinada pela combinação das estruturas reativas do antígeno e do anticorpo. Reversibilidade: determinada pela dissociação do complexo antígeno-anticorpo. Equilíbrio: determinado pela constante de associação K do complexo antígeno-anticorpo. Exotermia: as reações antígeno-anticorpo liberam calor. Afinidade: é a força de atração entre o antígeno e o anticorpo. Avidez: É a força de união entre o antígeno e o anticorpo.

3 Interações hidrofóbicas
Reação antígeno-anticorpo Forças de interação na reação antígeno-anticorpo Pontes de hidrogênio Ligação iônica a n t i c o r a n t í g e no Interações hidrofóbicas Forças de van der Waals Ligação iônica

4 Reação antígeno-anticorpo Princípios
ag + ac ag - ac k1 k2 A reação antígeno-anticorpo obedece ao princípio da lei de ação das massas. Keq = k1 k2 = ag - ac ag ac A constante de equilíbrio (Keq) mede a afinidade intrínseca do anticorpo pelo antígeno.

5 Reação antígeno-anticorpo Constante de equilíbrio e afinidade dos anticorpos
Keq para anticorpos com alta afinidade pelo antígeno Keq para anticorpos com baixa afinidade pelo antígeno K1 6 6 5 5 Ac [mol/L] Ac [mol/L] 4 4 3 3 2 2 K2 1 1 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 Ag [mol/L] Ag [mol/L] A inclinação da reta representa a constante de equilíbrio e mede a afinidade do anticorpo pelo antígeno.

6 Reação antígeno-anticorpo Variação de entalpia (calor de reação)
Anticorpo frio Anticorpo quente K(4 C) 6 6 5 5 Ac [mol/L] Ac [mol/L] 4 4 3 3 K(37 C) 2 2 K(37 C) 1 1 K(4 C) 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 Ag [mol/L] Ag [mol/L] Para um anticorpo frio, a temperatura de 40C oferece melhores condições de equilíbrio para o complexo antígeno-anticorpo. Para um anticorpo quente, a temperatura de 370C oferece melhores condições de equilíbrio para o complexo antígeno-anticorpo.

7 Reação de aglutinação Definição
É a formação de agregados de células interligadas por pontes moleculares de anticorpos que se combinam com epítopos iguais situados na superfície de células adjacentes. Teoria da malhas

8 Reação de aglutinação Forças que atuam sobre os eritrócitos
Tensão interfacial Eletronegatividade COOH- COOH- COOH- COOH- força de coesão entre os eritrócitos força de repulsão entre os eritrócitos

9 Reação de aglutinação Nuvem iônica
g = eletro-negatividade m = força iônica D = constante dielétrica

10 Reação de aglutinação Eletro-negatividade, força iônica e constante dielétrica
Eletro-negatividade (g): determinada pelo conjunto de cargas elétricas negativas da membrana eritrocitária que decorrem da presença de asialoglicoproteínas. Força iônica (m): determinada pela concentração de íons no meio de suspensão dos eritrócitos que modifica a nuvem iônica. Constante dielétrica (D): determinada pela presença de macromoléculas polarizadas que neutralizam parte das cargas elétricas negativas das hemácias, mede a condutividade elétrica do meio.

11 Reação de aglutinação Potencial zeta
m D g = eletro-negatividade m = força iônica D = constante dielétrica

12 Reação de aglutinação Potencial zeta
14 nm 25 nm Potencial zeta menor Potencial zeta maior

13 Reação de aglutinação Valores de potencial zeta
inespecífica Aglutinação (%) IgM IgG 100 Hemácias em NaCl = 0,85% Z(mV) -23 -18 -16 -10 -8 -7

14 Redução do potencial zeta em hemácias tratadas com diferentes enzimas
Reação de aglutinação Como modificar o potencial zeta Meio Aumento da constante dielétrica: albumina polivirilpirrolidona (PVP) dextran ficoll polietilenoglicol (PEG) Aumento da força iônica: cátions (Cr3+, Al3+, Fe3+) LISS (solução de baixa força iônica) Hemácias Redução da eletro-negatividade. IgG IgM bromelina papaína ficina Redução do potencial zeta em hemácias tratadas com diferentes enzimas Hemácias não tratadas bomelina papaína ficina Potencial Zeta (mV) - 19,6 - 14,1 - 10,1 - 9,0 Redução (%) 28,1 48,0 53,9

15 Scores para a reação de aglutinação
Scores e condições de centrifugação 1+ Scores para a reação de aglutinação Scores ++++ +++ ++ + O que visualizar apenas um agregado de eritrócitos um ou dois agregados de eritrócitos vários agregados de tamanho médio vários agregados pequenos nenhum agregado detectado = sobrenadante límpido botão de eritrócitos delineado agitação delicada Centrifugação