Centrifugação e Eletroforese

Apresentação em tema: "Centrifugação e Eletroforese"— Transcrição da apresentação:

1 Centrifugação e Eletroforese
Monitoria – Biofísica 01

2 Eletroforese

3

4

5 Centrifugação

6 O que é centrifugação? É um processo de separação em que a força centrífuga relativa gerada pela rotação da amostra é usada para sedimentar sólidos em líquidos, ou líquidos imiscíveis de diferentes densidades, separando-os. É usada em diferentes aplicações laboratoriais, industriais e domésticas. Realizar a centrifugação é acelerar o processo de decantação. Se o objectivo for separar rapidamente o sólido de um líquido, podemos submeter a mistura a uma centrífuga. Ela vai girando em alta velocidade e depositando no fundo as partículas sólidas, que são mais densas.

7 Técnica de centrifugação
Em geral, as misturas de interesse são introduzidas em tubos de diferentes tamanhos, que são dispostos num rotor de centrífuga. As centrífugas estão normalmente adaptadas para a utilização de diferentes tipos e tamanhos de rotores, conforme a velocidade e aplicação desejadas.

8 Técnica de centrifugação
Quando uma suspensão de partículas é centrifugada a sedimentação das partículas é proporcional à força aplicada. As propriedades da solução também irão interferir na taxa de sedimentação. Qualquer corpo ou partícula que apresente um movimento circular uniforme está submetido a uma força centrípeta, que tem como referência, o centro da trajectória circular que a partícula descreve, e pode ser representada pela relação:

9 Técnica de centrifugação
Quando uma suspensão de partículas é centrifugada a sedimentação das partículas é proporcional a força aplicada. As propriedades da solução também irão interferir na taxa de sedimentação. Qualquer corpo ou partícula que apresente um movimento circular uniforme está submetido a uma força centrípeta, que tem como referencia, o centro da trajetória circular que a partícula descreve, e pode ser representada pela relação: Fc = m . ac = m .v2/r , onde: m = massa do corpo ac = aceletração centripetal v = velocidade r = raio de rotação

10 Fatores que influenciam
Viscosidade da massa Concentração da massa Tamanho e regularidade dos cristais Rapidez da aceleração Força centrífuga: velocidade / diâmetro Tempo de friagem e descarga

11 Princípios básicos de sedimentação
Ao planejar um protocolo de centrifugação é importante ter em mente que: Quanto mais densa a estrutura biológica, mais rapidamente ela sedimenta num campo centrifugo. Quanto mais massiva a partícula biológica, mais rapidamente ela se move num campo centrifugo Quanto maior o coeficiente de fricção, mais lentamente a partícula vai se mover. Quanto maior a força centrifuga, mais rapidamente a partícula sedimenta. A velocidade de sedimentação de uma dada partícula será zero quando a densidade da partícula é igual a do meio ambiente.

12 Aula prática

13

14 Aula prática As técnicas que permitem o fracionamento celular e a obtenção de frações relativamente puras de organelas contribuíram muito para o desenvolvimento da biologia. As organelas são separadas pela centrifugação de um homogeneizado de células em que as membranas plasmáticas são rompidas.

15 Cuidados a ter com a centrífuga
Verifique se o rotor correto está sendo usado e se ele está corretamenteinstalado no eixo. Verifique se o rotor está preso antes de iniciar. Equilibre a carga no rotor - cada tubo necessita de um tubo de equilíbrio no compartimento oposto, com o mesmo volume de fluido;   Verifique se você está usando o tubo de centrífuga apropriada para o trabalho - eles podem se romper a uma velocidade muito alta. Você vai precisar de tubos especiais para altas velocidades de centrifugação.