Métodos de estudo em microscopia de luz e eletrônica

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1 Métodos de estudo em microscopia de luz e eletrônica
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2 Microscopia O microscópio é um instrumento que permite observar objetos não visíveis a olho nu. Isto se consegue através de um sistema óptico composto por lentes de cristal que aumentam a imagem do objeto.

3 Microscopia de Luz Evolução do microscópio de luz
Galileu Galilei inventou o Telescópio no século XVI – duas lentes num tubo Zacarias Jansen (holandês) inventou o primeiro microscópio composto, em 1660 Século XVII O primeiro microscópio era formado por três tubos encaixados 1595 – O primeiro microscópio era formado por três tubos encaixados - holandês Zacharias Janssen 1680 – O holandês Leeuwenhoek, cientista amador - duas chapas achatadas de metal e lente biconvexa

4 Microscopia de Luz Evolução do microscópio de luz
1595 – O primeiro microscópio era formado por três tubos encaixados - holandês Zacharias Janssen 1680 – O holandês Leeuwenhoek, cientista amador - duas chapas achatadas de metal e lente biconvexa Leeuwenhoek, final de 1600

5 Microscopia de Luz Evolução do microscópio de luz
Final do século XVII, o inglês John Marshall, microscópio composto, equipado com objetivas variando de 4X a 100X e um sistema de focoh Robert Hooke

6 Microscopia de Luz Evolução do microscópio de luz
Final do século XVII, o inglês John Marshall, microscópio composto, equipado com objetivas variando de 4X a 100X e um sistema de focoh

7 Microscopia de Luz Por 200 anos o microscópio permaneceu como um objeto exótico – Louis Pasteur, microrganismos Microscópio monocular do início modelo Zeiss, início século XX Microscópio binocular Microscópio eletrônico – 1932, por Ernest Rusca e Max Knoll

8 Microscopia de Luz

9 Microscopia de Luz

10 Microscópio óptico, Microscópio composto ou Microscópio de Campo claro
É um instrumento usado pelo estudante de citologia, histologia e outras disciplinas que estudam microrganismos ou objetos com medidas micrométricas e serve para aumentar a imagem. Basicamente, é constituído por uma parte mecânica e uma parte óptica.

11 Parte Mecânica Tubo Coluna ou braço Revólver Platina
Parafuso Macrométrico Parafuso Micrométrico Base ou pé

12 Parte Mecânica Base ou pé  suporte
Coluna ou braço  apoio paras as estruturas Tubo  peça de ligação entre a ocular e o revólver Revólver  peça giratória que contém as lentes objetivas Platina  suporta a preparação Parafuso Macrométrico, de passo largo, é para movimento de grande amplitude Parafuso Micrométrico, de pequeno passo, é destinado a focar o material

13 Parte Óptica Lentes oculares Lentes objetivas Condensador

14 Parte Óptica Condensador, concentra os raios luminosos  objeto
possui um diafragma de diâmetro modificável, proporciona uma maior ou menor intensidade luminosa Lentes objetivas, próximas do objeto, projetam a imagem ampliada do objeto em direção a ocular Lente ocular, funciona como uma lupa, amplia a imagem fornecida pela objetiva

15 Parte Óptica CONDENSADOR – geralmente negligenciado - não interfere no aumento da imagem, mas ele influencia em sua nitidez e riqueza de detalhes Age no LIMITE DA RESOLUÇÃO do sistema óptico, embora esta propriedade dependa principalmente das lentes objetivas

16 LIMITE DE RESOLUÇÃO LR de um microscópio é a capacidade de:
Separar detalhes Produzir imagens separadas de partículas muito próximas É a menor distância que deve existir entre dois pontos para que eles apareçam separado

17  é o comprimento de onda luz branca (verde-amarelo) = 0,55 m
Limite de Resolução LR = K .  AN K é uma constante 0,612  é o comprimento de onda luz branca (verde-amarelo) = 0,55 m AN é a abertura numérica da lente objetiva LR = 0, ,55 O limite e resolução é diretamente proporcional ao comprimento de onda e inversamente proporcional a abertura numérica.

18 n = menor índice da refração  = semi-ângulo de abertura
ABERTURA NUMÉRICA (AN), vem gravado na lente objetiva e sua determinação cabe ao fabricante da lente. Indica a resolução de uma lente objetiva Capacidade de captar a luz Fornecer detalhes da amostra AN = n. sen  n = menor índice da refração  = semi-ângulo de abertura

19

20 As objetivas trazem outras informações
160 ou 170, indica em milímetro o comprimento do tubo do microscópio, onde devem ser usadas as objetivas para que dêem melhores resultados. 0,17, distância de trabalho, que significa o tamanho da lamínula, para a qual as aberrações são corrigidas.

21 Códigos de cores das lentes objetivas
Aumento Cores 4X ou 5X Vermelho 10X Amarelo 40 ou 50X Azul claro 100X Imersão – óleo Branco

22 Imagem real ampliada e invertida

23 Outros tipos de microscópios
Microscópios Ópticos – MO Microscópio de Contraste de Fase Microscópio de Campo Escuro Microscópio de Fluorescência Microscópio de Polarização Microscópio Eletrônico – ME

24 Microscópio de contraste de fase – células vivas
Usa as propriedades da refração da luz Refração é a passagem da luz de um meio para outro. Microscópio de contraste de fase transforma diferentes fases luminosas em diferentes intensidade luminosa

25 Microscopia de luz convencional
Microscopia de contraste de fase

26 Microscópio de campo escuro
CONDENSADOR LUZ Objetiva Condensador é substituído por um condensador de fundo escuro A preparação é iluminada por raios oblíquos A célula fica com aparência brilhante e o fundo escuro

27 Microscopia de campo escuro - células de sangue.

28 Microscópio de Polarização
Quando um raio de luz atravessa certas substâncias do nosso corpo  acontece uma dupla refração Substâncias como dentes, ossos, fibras de colágeno e outras possuem um estado cristalino, arranjo molecular interno Prisma utiliza as propriedades de um único raio eliminando o outro 2 raios de luz = Raios polarizados

29 Microscópio de luz polarizada: da dentina (dente).
Microscópio de luz polarizada: Fibras de colágeno exibem birrefringência (brilhantes ou amarelas).

30 Microscópio de Fluorescência
Utiliza luz fluorescente – permite detectar proteínas ou estruturas marcadas com compostos fluorescentes Similar ao MO, exceto pela luz empregada  Luz ultra-violeta e pelos 2 conjuntos de filtros que desviam os raios do olho do observador.

31 Cultivo de astrócitos. Imunofluorescência verde contra GFAP (proteína de filamentos intermediários) e azul (união com DNA) Alberts et al. Biología Molecular de la célula. (1996) p. 856.

32 Microscopia Eletrônica

33 Microscopia Eletrônica
Inventado em 1932, na Alemanha, Ernest Ruska e Max Knoll Utiliza elétrons, comprimento de onda muito pequeno, limite de resolução 1.000X menor que microscópio de luz

34 Microscopia eletrônica, músculo estriado cardíaco.

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36 Medidas m nm Unidade de medida Símbolo Valor Micrômetro Nanômetro
0,001 mm Nanômetro nm 0, mm (10-6 mm) ou 10-3 m

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