Avaliação das moléculas da matriz extracelular que ligam heparina e podem contribuir para o estímulo da síntese do Proteoglicano de Heparam Sulfato Introdução:

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1 Avaliação das moléculas da matriz extracelular que ligam heparina e podem contribuir para o estímulo da síntese do Proteoglicano de Heparam Sulfato Introdução: Heparina é um glicosaminoglicano com conhecida ação anticoagulante e antitrombótica. Nas últimas décadas surgiu heparinas de baixo peso molecular (LMWH), obtidas por fragmentação (química ou enzimática) do polímero, que tem substituído a heparina nas suas diversas aplicações clínicas, com igual ou maior eficiência. Objetivo: entender os requisitos estruturais de LMWH que são necessários para desencadear o estímulo da síntese de Proteoglicano de Heparam das células endoteliais. Métodos: LMWH: Clexane® e o Fragmin®, previamente submetidas à N-dessulfatação e 2-O-dessulfatação (NAGASAWA, INOUE e TOKUYASU, 1979) e também à carboxirredução (TAYLOR e CONRAD, 1972). Cultura de Células - As células endoteliais utilizadas foram obtidas da aorta de coelho (BUONASSISI, 1973). Análise dos glicosaminoglicanos sintetizados - Alíquotas da célula e do meio de cultura foram analisados conforme descrito por TRINDADE et al, 2008. Marcação citoquímica – Células endoteliais plaqueadas em lamínulas foram expostas ou não (controle) a 100 mg/ml de Clexane ou à Fragmin overnight. A foram marcadas para detecção de Fibronectina e de Filamentos de actina, conforme descrito por TRINDADE et al., 2008. Resultados/Discussão: Conclusões: As LMWH utilizadas no presente estudo modificadas químicas ou não, foi possível observar uma sutil alteração na marcação de fibronetina, quando as células foram expostas às heparinas não modificadas. Estudos adicionais também devem ser realizados para a comprovação deste fato. Em relação à alterações da informação gênica dos componentes da matriz extracelular, os resultados ainda prelimindar mostram que trombospondina pode ser um dos alvos, além do PGHS, que sofre alteração (up regulation). Demais ensaios devem ser realizados. Referências: BUONASSISI (1973). Exp.Cell Res.76:363-368. DODGSON e PRICE (1962). Biochem. J. 84: 106–110. NAGASAWA, INOUE e TOKUYASU (1979). J. Biochem. (Tokyo). 86:1323-1329. TAYLOR e CONRAD Biochemistry (1972) 11(8):1383-1388. TRINDADE et al., (2008) J Cell Physiol 217(2):328-337. Grupamentos Sulfatos e carboxílico influenciam no estímulo da síntese de PGHS: As células endoteliais expostas para Clexane e Fragmin, conforme descrito em métodos. A Figura acima mostra a quantificação de Heparam Sulfato secretado para o meio de cultura, em com/mg de proteínas celulares. DS8 – Dessulfatado por 8 horas, N/O-DS – N e O-Dessulfatados, CR – carboxirreduzido Fibronectina e Citoesqueleto de Células Endoteliais expostas à LMWH: A-Células endoteliais não expostas à LMWH. B- Células endoteliais expostas à LMWH. C-Células endoteliais expostas LMWH carboxirreduzida. D-Células endotelias expostas à LMWH N- dessulfatada. E- Células endoteliais expostas à LMWH 2- O-dessulfatada. F- Células endoteliais expostas à LMWH 2- O-dessulfata e N- dessulfatada. Análises por microscopia de fluorescência Confocal. Klimeck, T. D. F.; Monteiro, P. S.; Biscaia, S. M. P.; Rossi, G.R.; Trindade, E.S. Programa de Pós Graduação em Biologia Celular e Molecular