Óxido Nítrico Sintetase

Apresentação em tema: "Óxido Nítrico Sintetase"— Transcrição da apresentação:

1 Óxido Nítrico Sintetase
E o seu papel na inflamação

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5 OXIDO NITRICO SINTASE ENDOTELIAL
INFLAMACAO - defesa do organismo comum em muitas patologias aparentemente distintas. PROCESSO INFLAMATORIO - eh iniciado por complexas series de eventos, sendo os passos prévios fundamentais mudanças vasculares que começam imediatamente e se desenvolvem nas primeiras horas. eNOS (oxido nítrico sintase endotelial) e NO (oxido nítrico) ligados a permeabilidade vascular envolvidos na inflamação

6 Mediadores envolvidos em mudanças na permeabilidade vascular
Histamina 5-HT Bradicinina Prostaglandinas Óxido nítrico (NO) Citocininas inflamatórias Fatores de crescimento

7 Mediadores iniciais Histamina liberados rapidamente
armazenados nas células 5 – HT

8 Fator de necrose tumoral induz iNOS produz óxido nítrico (NO) aumenta a permeabilidade vascular

9 Tipos de óxido nítrico sintetase
Óxido nítrico sintetase neural (nNOS) Óxido nítrico sintetase endotelial (eNOS) Óxido nítrico sintetase indutível (iNOS)

10 Óxido Nítrico Sintetases - NOS
NO é gerado pelo metabolismo da Arginina Arginine  +  Ca2+ +  Nitric Oxide Synthase      Nitric Oxide

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12 Óxido Nítrico Sintetases - NOS
3 Formas: Neural (n-NOS) Endotelial (e-NOS) Indutível (i-NOS)

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14 Óxido Nítrico Sintetases - NOS
i-NOS - Contolada por mediadores inflamatórios e citocinicas - Produz quantidades (desreguladas) de NO e-n-NOS - Produzem quantidades

15 Características desta enzimas
Estrutura tridimensional e-n-NOS contém sítios autoinibitório que é regulador da sensibilidade de Ca++ Possui um N-terminal que corresponde ao sítio de ligação para vários grupos, como: heme, arginina e hidrobiopterina (BH4). Estes grupos são ligados através de seu carbono terminal ao N-terminal e tal ligação é regulada por calmodulina.

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17 eNOS: Uma Enzima de Indução

18 Aumento da concentração de eNOS em células endoteliais humanas:
Fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF); Modulador de receptor de estrógeno seletivo; Exercícios físico (aumenta a expressão de RNAm que codifica eNOS; Neurite autoimune (células endoteliais e de Schwann nos nervos ciáticos).

19 Reguladores de eNOS: Dinâmicos alvos subcelulares;
Interações de proteína-proteína; Fosforilações; Estimulação de Ca2+ dependente-independente; Autocóides (danos no tecido e mudança do fluxo sanguíneo).

20 Reguladores da atividade de eNOS
CAV-1- Forma um inibidor fisiológico de e-NOS. É uma proteína que regula respostas vascvulares a NO. CaM e CaM co-imunoprecipates HSP90 (Heat shock protein 90) – Liga ao NO e NOS o ativa. Aumenta a sua atividade e a liberação de NO. Influencia a fosforilação e a junção de e-NOS ao HSP 90 e CaM

21 Fosforilação proteíca
e-NOS é primariamente fosforilada em resíduos de serina, tirosina treonina. A serina cinase B fosforila diretamente e-NOS na 1177 Ser (e-NOS humano) que aumenta a atividade de e-NOS.

22 Funções do e-NOS na Inflamação
e-NOS é fonte dinâmica de NO, abastecem as células constantemente i-NOS produz grande quantidade de NO Produz os efeitos Patológicos do NO

23 Os 2 principais linhas de pesquisa
1- in vitro ou admistração in vivo de NO exogénos 2- Utilizando inibidores de NOS Pontos fracos

24 Formas de Investigação
Usando e-NOS, i-NOS, n-NOS “inválidas” em camundongos Microsópio intravital O nº de Rolagem de Leucócito = iNOS Microscopia de Contraste Se há estimulação há de rolagem: i-NOS (2x) e eNOS (6x)

25 Ferramentas farmacológicas
Falta de seletividade dos inibidores para as isoformas; nNOs, eNOs e iNOs. Ação variável: local e tempo de ação Falta de estudos na regulação e modulação de Nos

26 HPS 90 e calmodulina (CaM) fosforilação de eNOs
eNOs  Cav 1 HPS 90 e calmodulina (CaM) fosforilação de eNOs eNOs fosforilado forma ativa Ap-Cav (derivado Cav-1)  liga-se ao eNOs -anti-inflamatório inibindo o NO Drogas: Geldanamicina & Radicicol(efeito semelhante) Wortmannin & LY294002(efeito contrário) inibe a fosforilação de eNOs fosfatidilinositol 3-cinase

27 Síntese de eNOs(Cav 1)  síntese de Ap-Cav
Inibe os efeitos: hemorragias,vasodilatação, edema, etc. Mecanismo de modulação -modificação estrutural da proteína, via Ap-Cav inibição da fosforilação (fosfatidilinositol 3-cinase) pelas drogas(Wortmannin e LY294002).

28 Considerações Finais