MICROSCOPIA CELULAR: TEORIA E PRÁTICA FACULDADE DE EXCELÊNCIA EDUCACIONAL DO RIO GRANDE DO NORTE - FATERN UNIVERSIDADE GAMA FILHO - UGF DISCIPLINA DE CITOLOGIA,EMBRIOLOGIA E HISTOLOGIA MICROSCOPIA CELULAR: TEORIA E PRÁTICA

MICROSCOPIA CELULAR:TEORIA E PRÁTICA Professoras: Adriana motta Monara Bittencourt de Amorim BIBLIOGRAFIA CONSULTADA: JUNQUEIRA e CARNEIRO, L.C. Histologia Básica. 9ed.Rio de Janeiro:Guanabara Koogan, 2004. Manual de Instruções da BIOVAL, 2007. Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

MICROSCÓPIO “APARELHO COM LENTES ÓPTICAS QUE MAXIMIZA UM SER OU ESTRUTURAS MINÚSCULAS A UM TAMANHO DE BOA OBSERVAÇÃO” Bactérias CÉLULA LEUCÓCITOS Células Sanguíneas Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

PRINCIPAIS COMPONENTES DE UM MICROSCÓPIO O MICROSCÓPIO ÓPTICO, É TAMBÉM CONHECIDO COMO MICROSCÓPIO DE LUZ COMPÕE-SE DE UMA PARTE MECÂNICA QUE SERVE DE SUPORTE PARA A PARTE ÓPTICA PARTE ÓPTICA É CONSTITUÍDA POR TRÊS SISTEMAS DE LENTES: O CONDENSADOR, AS OBJETIVAS E AS OCULARES. Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

PRINCIPAIS COMPONENTES DA PARTE ÓPTICA CONDENSADOR SUA FINALIDADE É PROJETAR UM CONE DE LUZ SOBRE AS CÉLULAS QUE ESTÃO SENDO EXAMINADAS AO MICROSCÓPIO. APÓS ATRAVESSAR AS CÉLULAS, ESSE FEIXE LUMINOSO, EM FORMA DE CONE, PENETRA NAS OBJETIVAS. OBJETIVAS PROJETAM UMA IMAGEM AUMENTADA , NO PLANO FOCAL DAS OCULARES, QUE NOVAMENTE A AMPLIA. OCULARES AS IMAGENS FORNECIDAS PELA OCULARES PODEM SER PERCEBIDAS PELA RETINA. Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

PARAFUSO MACROMÉTRICO PARAFUSO MICROMÉTRICO Condensador OCULARES BRAÇO OBJETIVAS PINÇA PARAFUSO MACROMÉTRICO PLATINA PARAFUSO MICROMÉTRICO LÂMPADA BASE Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

PARAFUSO MACROMÉTRICO PARAFUSO MICROMÉTRICO OCULARES Braço ou suporte OBJETIVAS REVÓLVER PLATINA condensador PARAFUSO MACROMÉTRICO LÂMPADA PARAFUSO MICROMÉTRICO BASE Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

PODER DE RESOLUÇÃO X LIMITE DE RESOLUÇÃO O PODER DE RESOLUÇÃO DE UM SISTEMA ÓPTICO É A SUA CAPACIDADE DE SEPARAR DETALHES. É EXPRESSO PELO LIMITE DE RESOLUÇÃO. LIMITE DE RESOLUÇÃO É A MENOR DISTÂNCIA QUE DEVE EXISTIR ENTRE DOIS PONTOS PARA QUE ELES APAREÇAM INDIVIDUALIZADOS. Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

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EXEMPLO DE LIMITE DE RESOLUÇÃO: É A MENOR DISTÂNCIA QUE DEVE EXISTIR ENTRE DOIS PONTOS PARA QUE ELES APAREÇAM INDIVIDUALIZADOS. ESPOROS DE LEVEDURAS CÉLULAS TUBULARES DO EPITÉLIO RENAL HEMÁCIAS O QUE DETERMINA, A RIQUEZA DE DETALHES DA IMAGEM FORNECIDA POR UM SISTEMA ÓPTICO É O SEU LIMITE DE RESOLUÇÃO, E NÃO O SEU PODER DE AUMENTAR O TAMANHO DO OBJETO. Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

DIFERENÇAS DE IMAGENS ENTRE UM MICROSCÓPIO ÓPTICO (MO) E UM MICROSCÓPIO ELETRÔNICO (ME) MICROSCOPIA ELETRÔNICA (ME) DE BACTÉRIAS COMENSAIS HEMÁCIAS LEUCÓCITO PLAQUETAS EOSINÓFILOS LINFÓCITO MICROSCOPIA ÓPTICA EM LÂMINA DE TECIDO SANGUÍNEO Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

DETERMINE QUAL O TIPO DE MICROSCÓPIO QUE SE UTILIZOU NA OBSERVAÇÃO DESSAS IMAGENS Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

PRINCIPAIS UNIDADES DE MEDIDAS USADAS NA MICROSCOPIA MICRÔMETRO (µm) 1mm = 1.000 μm NANÔMERO (nm) 1μm = 1.000 nm 1nm = 10 Å ÂNGSTROM (Å) ESTA UNIDADE ESTÁ SENDO SUBSTITUÍDA PELO NANÔMETRO Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

ESPECIFICAÇÕES DAS OBJETIVAS E SUAS AMPLIAÇÕES (COM OCULAR DE 10X) AMPLIAÇÃO TOTAL (VER SEMPRE AS OCULARES) 04 x 40 X 10 x 100 X 40 x 400 X 100 x (Sempre usar com óleo de Imersão) 1000 X Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

OPERAÇÃO (PRÁTICA LABORATORIAL) NORMAS E CONDUTAS NA PRÁTICA LABORATORIAL OBEDECER TODAS AS NORMAS DE BIOSEGURANÇA (EPI/EPC). LAVAR AS MÃOS NA ENTRADA E NA SAÍDA APÓS A PRATICA. É OBRIGATÓRIO QUE VOCÊ CONHEÇA AS PARTES ÓPTICAS E MECÂNICAS DOS MICROSCÓPICOS ANTES DE USÁ-LO. NÃO MANUSEAR O APARELHO COM AS MÃOS SUJAS OU MOLHADAS NUNCA DESLOQUE O APARELHO COM A LÂMPADA ACESA. NA REMOÇÃO DO EQUIPAMENTO, SEGURE-O FIRMEMENTE COM UMA DAS MÃOS NO BRAÇO E A OUTRA NA BASE. É PROIBIDO O USO DE CÂMARAS FOTOGRÁFICAS DURANTE A EXPOSIÇÃO DA AULA PRÁTICA. Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

COMO USAR O MICROSCÓPIO INICIE SEMPRE PELA OBJETIVA DE MENOR AUMENTO. NA OBSERVAÇÃO DE UMA PREPARAÇÃO, OLHE PELA OCULAR E MOVA O MACROMÉTRICO MUITO LENTAMENTE, ASSIM QUE A IMAGEM APARECER, MESMO CONFUSA, PARE E COMPLETE A FOCALIZAÇÃO COM O MICROMÉTRICO. USANDO A OBJETIVA 100x O USO DA OBJETIVA DE IMERSÃO É MAIS DELICADA POIS, A DISTÂNCIA FOCAL ENTRE A FACE DA OBJETIVA E A PARTE SUPERIOR DA LAMÍNULA, DIMINUI QUANDO A AMPLIAÇÃO É AUMENTADA. Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

COLORAÇÃO QUASE TODAS AS ORGANELAS SÃO TRANSPARENTES E INCOLORES, O QUE DIFICULTA SEU ESTUDO MICROSCÓPICO, LOGO A COLORAÇÃO FACILITA A VISUALIZAÇÃO DAS ESTRUTURAS DOS TECIDOS. PARA VENCER ESSA DIFICULDADE, FORAM CRIADOS NUMEROSOS PROCESSOS DE COLORAÇÃO QUE TORNAM VISÍVEIS OS DIVERSOS COMPONENTES CELULARES. Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

A MAIORIA DOS CORANTES COMPORTA-SE COMO ÁCIDOS OU BASES ESTRUTURAS BASOFÍLICAS: ESTRUTURAS ACIDÓFILAS: SÃO OS COMPONENTES DOS TECIDOS QUE SE CORAM FACILMENTE COM CORANTES BÁSICOS (Hematoxilina) EX: ESTRUTURAS ÁCIDAS (NÚCLEOS) SÃO OS COMPONENTES DOS TECIDOS QUE SE CORAM FACILMENTE COM CORANTES ÁCIDOS (Ex:EOSINA) EX: ESTRUTURAS BÁSICAS (ORGANELAS CITOPLASMÁTICAS) Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

TÉCNICAS DE COLORAÇÃO MAIS USUAIS, TÉCNICA DE IMPREGNAÇÃO PELA PRATA E ALGUNS DOS RESULTADOS OBTIDOS COM ELAS: TÉCNICAS CONSTITUINTES NÚCLEOS CITOPLASMA FIBRAS COLÁGENAS RETICULARES HE HEMALÚMEN (Hematoxilina), EOSINA HEMATOXILINA FÉRRICA AZUL PRETO ROSA TRICRÔMICO DE MASSON FUCCINA ÁCIDA E PONCEAU DE XILIDINA, VERDE-LUZ VERMELHO VERDE IMPREGNAÇÃO ARGÊNTICA PARA FIBRAS SOLUÇÕES DE SAIS DE PRATA Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

OS MICROSCÓPIOS MODERNOS UTILIZAM LASERS COMPLEXOS, DETECTORES EXTREMAMENTE SENSÍVEIS, OBJETIVAS PODEROSAS. PERMITEM FILMAR DIVISÃO CELULAR, O TRÁFICO DE MOLÉCULAS DENTRO DAS CÉLULAS, PERMITEM OBSERVAR CERTAS PROTEÍNAS NO CÉREBRO DE ANIMAIS VIVOS ETC. Profª Monara Bittencourt de Amorim Farmacêutica-Bioquímica

EXERCÍCIOS DE FIXAÇÃO 1.Defina microscópio, suas principais estruturas ópticas e mecânicas, observando os cuidados a serem utilizados no manuseio deste aparelho. 2.Diferencie Poder de Resolução de Limite de Resolução. 3.Quais as características para cada parte do Microscópio óptica ? 4.Quais os cuidados a serem observados antes de manusear o aparelho? 5.De acordo com as oculares de 22x, calcule a ampliação total de uma imagem observada por objetivas de : 05x,10x,20x,40x e 100x. Jamais esqueçam de acrescentar os cálculos destas respostas na prova 6.Defina Ampliação Total. 7.Cite 6 elementos estruturais de um Microscópio Óptico. 8.Quais os dois principais corantes da Técnica de coloração por HE? 9.Quais os cuidados individuais que se deve ter ao uso dos laboratórios? 10.Defina Equipamento de Proteção Individual (EPI). 11.Qual a importância dos Equipamento de Proteção Coletiva (EPC)? 12.Cite 5 condutas inapropriadas dentro de um laboratório. 13.Quais as vacinas que devem ser tomadas antes de se adentrar dentro de um laboratório com riscos biológicos? 14. O que são riscos e quais os principais relacionados com a área da saúde? 15. Qual a única objetiva que só deve ser usada com óleo de imersão?