UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE QUÍMICA Departamento de Química Orgânica Grupo de Estudo de Substâncias Naturais Orgânicas - GESNAT  Citotoxicidade da 4-n-propilcumarina mammea B/BA isolada de Kielmeyera argentea contra células U251 de glioblastoma humano Autor: Heiter Boness heiter@ufba.br Orientador: Prof. Dr. Frederico Guaré Cruz

Introdução v Glioblastoma multiforme é um tumor maligno primário do SNC classificado pela OMS como astrocitoma grau IV Glioblastoma observado através de Ressonância Magnética por Imagem

Glioblastoma multiforme Introdução v Glioblastoma multiforme Tratamento: cirurgia, radioterapia e quimioterapia Sobrevida: 12 meses Custo total > R$20.000,00 temozolomida (Temodal®)

Gênero Kielmeyera (Calophyllaceae): endêmico da América do Sul; Introdução v Gênero Kielmeyera (Calophyllaceae): endêmico da América do Sul; agrega cerca de 40 espécies. No Brasil, ocorrência destaca-se nos biomas Cerrado e Mata Atlântica K. variabilis (malva-do-campo) K. coriacea (pau-santo)

Química do gênero Kielmeyera Introdução v Química do gênero Kielmeyera 4-Alquil e 4-fenilcumarinas Xantonas Bifenilas Derivados poliprenilados do floroglucinol Cortez et al., Phytochemistry, (47), 1367-1374, 1998 Nogueira et al. Biochem. Syst. and Eco., (36) 921–924, 2009 Gottlieb et al. Phytochemistry, (8) 665-666, 1969 Almeida et al. Tetrahedron Letters, (52) 7108-7112, 2011

Kielmeyera argentea Introdução v Cruz et al. Phytochemistry, (48) 4, 703-706, 1998 Constituintes químicos isolados a partir do caule de K. argentea

As 4-alquil e 4-fenilcumarinas Introdução v As 4-alquil e 4-fenilcumarinas

Atividade citotóxica v Linhagem de células humanas KB GUILET et al., Journal of Nature Products, 64, 563-568, 2001 Calophyllum dispar ED50 = 9 μg/mL ED50 = 6 μg/mL R ED50 = 15 μg/mL ED50 = 5 μg/mL

Atividade citotóxica v Linhagens de células do câncer de colón YANG et al., Journal Planta Médica, 71, 852-860, 2005 Mammea americana IC50 IC50 SW-480 14,2 μM 14,7 μM HT-29 12,3 μM 12,5 μM HCT-116 11,5 μM 12,0 μM

Atividade citotóxica v Testes in vitro contra linhagen de células tumorais U251 REYES-CHILPA et. Life Sciences, 75, 1635-1647, 2004 Calophyllum brasiliense IC50 > 25 μM IC50 = 0,59 μM

Atividade citotóxica v Testes in vitro contra linhagen de células tumorais U251 REYES-CHILPA et. Life Sciences, 75, 1635-1647, 2004 Calophyllum brasiliense IC50 = 1,85 μM IC50 = 1,47 μM IC50 = 9,4 μM

Estudar a química das raízes de Kielmeyera argentea; Objetivos v Estudar a química das raízes de Kielmeyera argentea; avaliar a citotoxicidade in vitro das 4-alquil e 4-fenilcumarinas isoladas de K. argentea frente a células de glioblastoma humano da linhagem U251.

Parte experimental : coleta v Um espécime de K. argentea foi coletado na restinga do Parque Metropolitano do Abaeté, Salvador - BA e identificado pela botânica Msc. Maria Lenise S. Guedes (IBIO-UFBA) Espécime de K. argentea e Parque Metropolitano do Abaeté, Salvador - BA

Parte experimental : isolamento e purificação v Procedimento experimental para o isolamento e purificação das substâncias presentes no extrato hexânico das raízes de K. argentea

Técnicas de RMN de 1H e 13C uni- e bidimensionais Parte experimental : análise espectrocópica v Técnicas de RMN de 1H e 13C uni- e bidimensionais RMN Varian Inova 500

Determinação estrutural: substância 1 v Espectro de RMN de 1H [500 MHz, CDCl3, δ (ppm)] da substância 1

Determinação estrutural: substância 1 v 5-OH 7-OH H-3 e Espectro de RMN 1H [500 MHz, CDCl3, δ (ppm)] da substância 1

Determinação estrutural: substância 1 v 2 CH3 -CH2 mammea B/BA 2 CH3 -CH3 -CH2 -CH2 -CH -CH2 -CH Ampliação do espectro de RMN 1H (região entre δ 0 - 2,8) da substância 1

Substâncias isoladas das raízes de K. argentea v 1 2 3 4

Avaliação da atividade citotóxica v Laboratório de Neuroquímica e Biologia Celular (LabNq) - ICS - UFBA Ensaio in vitro utilizando células de glioblastoma humano da linhagem U251 Condições de cultivos: 37 °C, 5% CO2, 72 h A substância testada foi solubilizada em DMSO Avaliação da viabilidade celular: nível de redução do MTT Leitura a 540 nm

Avaliação da atividade citotóxica v mammea B/BA EC50 = 6,6 µM Gráfico 1. Citotoxicidade da substância mammea B/BA para células U251 de glioblastoma humano

Avaliação da atividade citotóxica v mammea B/BA EC50 = 6,6 µM Gráfico 1. Citotoxicidade da substância mammea B/BA para células U251 de glioblastoma humano Gráfico 2. Viabilidade celular após tratamento com a temozolomida: sensibilidade somente a partir de 30 µM

Considerações finais v A 4-n-propilcumarina mammea B/BA apresentou potencial atividade citotóxica in vitro contra células de glioblastoma humano da linhagem U251. Em continuidade a este trabalho, pretende-se avaliar também a citotoxicidade das demais 4-alquil e 4-fenilcumarinas isoladas das raízes de K. argentea.

Agradecimentos v LabNq