Exercicios Enzimas
(a) Projete 1/v versus 1/[S] para estes dados (a) Projete 1/v versus 1/[S] para estes dados. Há indicação de que a penicilinase segue uma cinética de Michaelis-Menten? Em caso afirmativo, qual é o valor de KM ? Questao (b) Vmax? 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 -4,0 -2,0 0,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 12,0 1/[S] (x 105 M-1) 1/V (x 109 ) Km - Vmax O gráfico de 1/V versus 1/[S] fornece uma reta. Portanto, indica que a equação de Michaelis Menten se aplica a cinética em questão. Vmax [S] V = Km + [S] Pelo gráfico: - 1 - = 1,92 x 105 Km = 0,52 x 10-5 M Km 1 = 1,46 x 109 Vmax = 0,68 x 10-9 moles.min-1 Vmax *Significado de Km Km = [S] quando V = ½ de Vmax
(c) Qual é o valor do número de transformação (turnover) da penicilinase nestas condições experimentais? (Considere um centro ativo por molécula de enzima) Turnover é definido como número de moléculas de substrato transformados por minuto por molécula de enzima (em condições de V = Vmax). Vmax = 0,68 x 10-9 moles.min-1 0,68 x 10-9 moles X moleculas 1 mol 6,0 x 1023 moleculas (número de Avogrado!) X = (0,68 x 10-9 moles )(6,0 x 1023 moleculas) = 4,08 x 1014 moleculas de substrato 1 mol Cálculo do número de moléculas de enzimas presentes no tubo: Cada tubo contém 10-9 g de penicilase purificada. O peso molecular de penicilase é 29600 g/mol. 29600 g de enzima 1 mol ou 6,0 x 1023 moleculas 10-9 g Y (10-9 g )(6,0 x 1023 moleculas) 6,0 x 1014 2,03 x 1010 moléculas de enzimas Y = = = 2,96 x 104 29600 g Como existe um sítio ativo por molécula de enzima, cada molécula de enzima transforma uma molécula de substrato por vez. Assim, 2,03 x 1010 moléculas de enzimas tranformam por min 4,08 x 1014 de moléculas de substrato. 4,08 x 1014 Turnover = = 2,0 x 104 moléculas de substrato transformados por molécula de enzima 2,03 x 1010
0,68 x 10-9 moles X moleculas 1 mol 6,0 x 1023 moleculas (número de Avogrado!) X = (0,68 x 10-9 moles )(6,0 x 1023 moleculas) = 4,08 x 1014 moleculas de substrato 1 mol Cálculo do número de moléculas de enzimas presentes no tubo: Cada tubo contém 10-9 g de penicilase purificada. O peso molecular de penicilase é 29600 g/mol. 29600 g de enzima 1 mol ou 6,0 x 1023 moleculas 10-9 g Y (10-9 g )(6,0 x 1023 moleculas) 6,0 x 1014 2,03 x 1010 moléculas de enzimas Y = = = 2,96 x 104 29600 g Como existe um sítio ativo por molécula de enzima, cada molécula de enzima transforma uma molécula de substrato por vez. Assim, 2,03 x 1010 moléculas de enzimas tranforma por min 4,08 x 1014 de moléculas de substrato. 4,08 x 1014 Turnover = = 2,0 x 104 moléculas de substrato transformados por molécula de enzima 2,03 x 1010