Microbiologia Clínica

Microbiologia Clínica
Micobactérias Microbiologia Clínica Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira
Introdução “Febre, hemoptise, dispnéia e suores noturnos. A vida inteira que podia ter sido e que não foi Tosse, tosse, tosse.” – Pneumotórax. Manuel Bandeira, 1966. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Introdução Um terço da população mundial está infectada com o bacilo Em 2010, 9 milhões de pessoas desenvolveram a doença É a principal causa de morte em pacientes com HIV Entre as doenças infecciosas é a quarta causa de morte Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Introdução Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

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Taxa de mortalidade por tuberculose
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Casos de TB nos EUA, 82 a 2010 Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Taxa de incidência de TB, 1990 a 2010

Tuberculose e HIV ART = Terapia antiviral para HIV TB = casos de tuberculose Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Introdução Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

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Micobactérias: Parede celular
1 – lipídeos de membrana 2- ácido micólico 3- polissacarídeo (arabinogalactana) 4- peptideoglicano 5 – membrana plasmática 6 – lipoarabinomanana (LAM) 7 – fosfatidilinositol 8 – parede celular Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Tuberculose pulmonar Mycobacterium tuberculosis

Granuloma Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Tuberculose extra-pulmonar

Resistência à degradação

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Incidência de tuberculose por 100.000 habitantes - 2010

Hanseníase Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Mycobacterium leprae Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Diagnóstico Laboratorial
Coleta de escarro por expectoração Obtido após esforço de tosse, volume ideal é de 5 a 10 mL. Amostras contendo apenas saliva não devem ser aceitas. Recipiente Descartável, boca larga, estéril, transparente e identificado com todos os dados do paciente. Identificação SEMPRE no corpo do frasco e nunca somente na tampa. Coleta Deve ser realizada pelo próprio paciente, de preferência em local aberto ou sala bastante arejada. Coletar de preferência pela manhã, ao despertar. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Diagnóstico Laboratorial
Outras amostras: lavado gástrico, lavado bronco-alveolar, expectoração induzida, urina, biópsias, sangue, medula óssea. Transporte e Conservação Manter sob refrigeração, protegido do calor e luz solar. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Baciloscopia Exame de execução rápida, fácil e de baixo custo. Identifica os indivíduos que estão eliminando os bacilos e são portanto fontes de infecção. Serve para acompanhamento da eficácia do tratamento. Para o exame ser positivo estima-se que são necessários entre a bacilos por mL de escarro. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Baciloscopia Confecção do esfregaço Fixação Coloração de Ziehl-Neelsen Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Baciloscopia – coloração de Ziehl Neelsen
1 – Cobrir a lâmina com Fucsina fenicada 2 – Aquecer suavemente com ajuda do bico de Bunsen até começar a desprender vapor e então deixar esfriar. Nunca deixar a solução de fucsina ferver. Repetir esta etapa 3 vezes. Ao final, lavar com água corrente delicadamente. 3 – Cobrir todo o esfregaço com solução de álcool-ácido. Agitar a lâmina delicadamente. Deixar agir por dois minutos. Ao final, lavar com água corrente delicadamente. 4 – Cobrir as lâminas com azul de metileno por 30 segundos. Ao final, lavar com água corrente delicadamente. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Baciloscopia – coloração de Ziehl Neelsen
Leitura da lâmina Micobactérias apresentam-se como bastonetes delgados, ligeiramente curvos, corados em vermelho. O fundo do esfregaço fica azul. Ler no mínimo 100 campos em objetiva de maior aumento. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

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Resultado Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Bacterioscopia - Causas de erros
Amostra inadequada Esfregaços muito espessos ou delgados Uso de lâminas arranhadas Depósitos de fucsina cristalizada ou seca Descoramento insuficiente ou demasiado Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Cultura Mais sensível que a baciloscopia. Requer a partir de 10 bacilos por mL de escarro para o exame ser positivo. Diagnóstico mais precoce da doença Permite o estudo posterior do microrganismo (tipagem molecular, sensibilidade aos antimicrobianos) Há necessidade de descontaminação da amostra biológica com solução de N-acetil-cisteína + NaOH 1N, citrato de sódio 0,1N Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Meios de cultura Lowenstein-Jensen Glicerol (carbono) e Asparagina (nitrogênio) Maioria das espécies Piruvato (carbono) e Asparagina (nitrogênio) M. bovis e M.africanum 7H10 e 7H11 (sólidos) 7H9 (líquido) Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Incubação e Leitura Incubar os meios semeados a 37 graus. Após 48 horas observar se há contaminação por outras bactérias. Continuar observando a cultura por até 6 semanas. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Resultado As colônias são de cor creme, rugosas, desenvolvem-se na superfície do meio e não alteram a cor do meio LJ. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Cultura positiva Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Colônias de Mycobacterium tuberculosis Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Resultado Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Teste Tuberculínico (PPD)

Teste tuberculínico (PPD)

Interpretação A interpretação do resultado depende da população a qual o paciente está incluído: O resultado é positivo quando: Pacientes HIV+ e crianças não vacinadas > 5 mm Outros > 10mm Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Identificação das Micobactérias
Testes bioquímicos (niacina e nitrato) HPLC Moleculares Comerciais (GEN-PROBE, INO-LIPPA) In-house (PCR - RFLP) Sequenciamento genético do gene do RNA ribossomal 16S, genes HSP65 e RPOB Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

PCR RFLP Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Teste rápido molecular
Permite identificar a presença da bactéria e a sensibilidade ao antibiótico rifampicina por PCR em 2 horas. Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Teste de sensibilidade aos antimicrobianos

Sistema automatizado Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Ensaios imunológicos Interferon gamma release assays (IGRAs) - QuantiFERON-TB Gold test Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

Tratamento para casos novos

Resistência Multiresistente (MDR): resistente à isoniazida e rifampicina e a um terceiro fármaco Extensamente resistente (ER): resistência à isoniazida e rifampicina e a pelo menos 3 das 6 outras classes de antibióticos. O TB adquire resistência aos antibióticos apenas por mutação e não por transdução, conjugação ou transformação) Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

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Fonte: Prof. Leonardo Sokolnik de Oliveira @professor_leo

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