Diagnóstico Imunológico

Apresentação em tema: "Diagnóstico Imunológico"— Transcrição da apresentação:

1 Diagnóstico Imunológico

2 APLICAÇÕES DOS TESTES SOROLÓGICOS
Diagnóstico Acompanhamento terapêutico Epidemiologia

3 Diagnóstico de uma doença e a janela imunológica

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5 AG AC DETECÇÃO DE ANTÍGENOS E ANTICORPOS Precipitação Aglutinação
Policlonais Monoclonais AG Íntegro Recombinante SISTEMA REVELADOR AC Extrato Purificado Peptídeo Fluorocromo Radioisótopo Enzima Precipitação Aglutinação

6 Fluorocromos são substâncias que absorvem luz ultravioleta e emitem luz visível, ou seja, ficam fluorescentes

7 Anticorpos - a chave para um diagnóstico
Todas as reações de diagnóstico que usam Ag-Ac, têm por base a capacidade de um Ac reconhecer um dado epítopo- parte estrutural reativa de um antigénio. Tipos de Anticorpos: Monoclonais - reagem apenas com um epítopo específico de um Ag. Policlonais - ligam-se a vários epítopos de um antígeno.

8 Anticorpos Monoclonais (mAb)
Os anticorpos monoclonais (década de 70): representaram um grande avanço na linha de diagnóstico imunológico dos laboratórios, com eles foi possível aumentar a especificidade dos "kits" e assim, obter resultados mais confiáveis. Anticorpos monoclonais: são anticorpos que possuem especificidade para apenas um determinado epítopo do antígeno, diferente dos anticorpos policlonais, onde temos varias imunoglobulinas respondendo a diferentes epítopos de uma mesma molécula antigênica.

9 Como é a nossa resposta humoral para um antígeno?
Nossa resposta imunológica normal a um antígeno é uma resposta policlonal, ou seja, há uma estimulação múltipla de vários clones formadores de anticorpos, cujos produtos representam uma mistura de imunoglobulinas.

10 Estratégias para produção de mAbs
Célula plasmática produtora do anticorpo de interesse. Objetivo: imortalizar linfócitos B - Fusão com mieloma. Mieloma: Linfócito imortal. Células de mieloma escolhidas devem ter características principais: (1) não produzir imunoglobulinas; (2) crescer em meio normal e não em meio de seleção.

11 Produção de Anticorpos Monoclonais
Por fim, você terá hibridomas (células híbridas) que podem ser mantidas in vitro indefinidamente e que irão secretar anticorpos com especificidade definida. OS ANTICORPOS PRODUZIDOS POR HIBRIDOMAS, DERIVADOS DE UM ÚNICO CLONE, SÃO CONHECIDOS COMO ANTICORPOS MONOCLONAIS (AcMo)

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13 1- Imuniza-se o rato, camundongos ou hamsters com antígeno e retira-se o baço ou o linfonodo desses animais, ricos em linfócitos B. 2- Essas células são misturadas com o mieloma (não secretor de Ig e que não cresce em meio seletivo) 3- Os hibridomas são testados quanto à presença de anticorpos reativos para o antígeno usado na imunização

14 4- Assim que o sobrenadante do poço revela a presença de anticorpos, as células são clonadas e os seus sobrenadantes testados novamente; 5- Os poços positivos são reclonados para garantir a monoclonalidade e a isotipia

15 Por que é necessário usar células de mieloma que cresça em meio de cultura normal, mas não cresça em meio “seletivo”?

16 CARACTERÍSTICAS DOS ANTICORPOS
MONOCLONAIS Homogeneidade Especificidade Habilidade para ser produzido em quantidades ilimitadas

17 APLICAÇÕES DOS ANTICORPOS MONOCLONAIS
Identificação de marcadores fenotípicos e análise funcional de moléculas de superfície celular Imunodiagnóstico de doenças infecciosas Diagnóstico e terapia de tumores

18 Terapia para algumas doenças
OKT3, se liga a molécula de CD3 na superfície de linfócitos T, é utilizado para prevenir rejeição aguda de órgãos transplantados, por exemplo, rim;