Imunologia no Quadro da Patologia e

Apresentação em tema: "Imunologia no Quadro da Patologia e"— Transcrição da apresentação:

1 Imunologia no Quadro da Patologia e
Análises Clínicas Importância da Detecção de Ag e AC: Elucidar processos patológicos Diferenciar as fases das doenças Selecionar Doadores de Sangue Selecionar doadores e receptores de órgãos transplantados Avaliar o prognóstico das doenças Avaliar a eficácia da terapêutica e da suspensão da terapêutica

2 Testes Sorológicos Algumas técnicas usadas Chamados Imunoensaios
Marcados Não marcados Multiparamétricos Respeitar Regras Controle Rigoroso Técnicas Padronizadas Controle de Qualidade Algumas técnicas usadas Eletroforese Imunoblotting Citometria de Fluxo Imunofluorescência PCR / Real Time PCR Precipitação / Imunodifusão Aglutinação ELISA RIA Nefelometria Turbidimetria Automação

3 Eletroforese (SDS-PAGE)

4 Transferência Gel/ membrana/ filtro Tampão ( +) ( - ) Gel
Membrana transferência preenchimento suporte Papel filtro

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6 Imunoblotting ou Western Blotting (proteínas ou glicoproteínas)
SDS-PAGE 2. Transferência 3. Bloqueio (BSA ou Leite) 4. Solução AC 5. Quimioluminescência ou Iodo Revelação Densitometria óptica Determinação [proteínas] Imunoprecipitação: Anticorpo h Proteína-A Sepharose Lavagem Centrifugação Tampão Laemnli SDS-PAGE Anticorpo (Overnight) Proteína-A 126I Densitometria Óptica das bancas Amostra

7 Imunofluorescência 3 Tipos: Direto:
Passos 1 e 2 (Ac marcado com fluorocromo). Usado para pesquisa de AC em células (imunocitoquímica) e tecidos (imunohistoquímica) Ex da aplicabilidade: biópsia de doenças imunológicas (pele, rins, sífilis, herpes simples, varicela-zoster) 2. Indireto: Usado para aumentar a sensibilidade do método Passos 1, 2 e 3 3. Sistema Avidina-Biotina: Técnica de amplificação Avidina+Biotina = complexo Avidina pode ser saturada com fluoresceína (verde), ficoeritina (vermelha), peroxidase (M. óptica), ferritina (M. eletrônica). Várias biotinas podem se ligar ao AC = amplificação da fluorescência interesse