Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínica

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1 Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínica

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3 Introdução à Microbiologia Clínica
O exame microbiológico deve responder às seguintes perguntas: - Há bactérias presentes na amostra? - Qual? - Quais medicamentos devem ser utilizados? Exame bacterioscópico Cultura Provas de identificação Teste de sensibilidade aos antimicrobianos

4 Cultura de bactérias – Aspectos Gerais
Coleta da amostra: Uso de antibióticos? Evitar contaminação da amostra Quantidade de amostra suficiente Transporte da amostra Qual o sítio anatômico da coleta Correta identificação da amostra Em que momento deve ser feita a coleta? 4

5 Cultura de bactérias – Aspectos Gerais
Semeadura: Quais meios de cultura semear? Como semear? Incubação: Qual temperatura? Quanto tempo? Qual concentração de CO2?

6 Semeadura - Técnicas Técnicas de isolamento de microrganismos:
técnica de esgotamento técnica de semeadura em superfície método de pour-plate

7 Semeadura por esgotamento

8 Semeadura em superfície

9 Semeadura – Qual meio utilizar?
MacConkey: seletivo e diferencial (lactose) para Gram negativos Sangue: enriquecimento e diferencial (hemólise) Tioglicolato: enriquecimento, cultura de anaeróbios estritos SS: seletivo e diferencial (lactose). Thayer-Martin: enriquecimento e seletivo

10 Meios de cultura e amostras biológicas
Ferida cirúrgica: AS, MC, LJ e SAB Coprocultura: MC e SS Escarro: AS e MC Escarro-tuberculose: LJ Secreção nasal: AS e MC Ponta de cateter: AS Urina: CLED e MC AS: agar sangue LJ: Lowenstein-Jensen MC: MacConkey SAB: Sabouraud

11 Condições de crescimento
Oxigênio Aeróbicos estritos Anaeróbicos facultativos Anaeróbios obrigatórios Anaeróbios aerotolerantes Microaerófilas 11

12 Incubação Estufa Jarra de anaerobiose

13 Meios de Cultura Aspectos gerais
Cultivar e manter microrganismos viáveis no laboratório Substâncias essenciais para o crescimento das bactérias Crescimento seletivo Demonstração de propriedades biológicas Isolamento 13

14 Meio de Cultura Principais produtos e compostos utilizados
Hidrolizados de proteínas Carboidratos Tampões Enriquecimento Inibidores

15 Meio de Cultura Principais produtos e compostos utilizados
Indicadores de pH Outros indicadores Ágar Substratos para a ação de enzimas

16 Classificação Formulação
Sólidos (ágar) 1 a 2,0 % Semi-sólidos (ágar) 0,05 a 0,3 % Caldos Ativação das culturas, repiques de micro-organismos, provas bioquímicas

17 Finalidade Meios de pré-enriquecimento
Microrganismos injuriados Ex: Água peptonada,, Caldo lactosado Caldo lactosado Caldo lactosado

18 Finalidade Meios de Enriquecimento
Ideal para quando há poucos micro-organismos, crescimento lento, exigentes e fastidiosos. Ex: infusão de cérebro e coração (BHI), Caldo Tioglicolato Caldo tioglicolato

19 Finalidade Diferenciais
Identifica micro-organismos parecidos Ex: Ágar Sangue, Ágar MacConkey Ágar MacConkey

20 Finalidade Seletivos Contém substâncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros Ex: Ágar Salmonella-Shigella (SS) - Isolamento Salmonella e Shigella sp Ágar Salmonella-Shigella (SS)

21 Finalidade Identificação
Realização de provas bioquímicas e verificação de funções fisiológicas de organismos Ex: Ágar Citrato, Ágar Bile-Esculina Ágar bile-esculina

22 Finalidade Identificação
Avaliam determinadas atividades metabólicas permitindo caracterização e identificação Ex: Uréia, Ágar TSI (Tríplice açucar ferro) Ágar TSI (tríplice açúcar ferro)

23 Meios de Transporte e Conservação
Meio Stuart Cary Blair Salina Tamponada Ágar Nutriente

24 Meios de Transporte e Conservação Meio Stuart
Impede a multiplicação do microrganismos e garante apenas sua sobrevivência. Cor original do meio: Branco opalescente. Não há evidência de crescimento bacteriano.

25 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Chocolate
Meio rico e não seletivo Microrganismos exigentes Base - sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta (hemina e hematina) Haemophilus sp., Neisseria sp.,

26 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Chocolate
Haemophilus sp. Neisseria sp.

27 Meios para Crescimento e Isolamento Thayer Martin
Ágar Chocolate com Vancomicina (G+), Colistina (G-), Nistatina (f) e Trimetoprim

28 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Sangue
Meio rico e não seletivo Gram negativo e Gram positivo, fungos filamentosos (bolores) e leveduras Eritrócitos íntegros (padrões de hemólise nítidos)

29 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Sangue
S. aureus - colônias -hemolíticas

30 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar MacConkey
Isolamento de bacilos Gram negativos (seletivo) Inibe bactérias Gram positivas Utilização de lactose (diferencial) Lactose positiva – coloração avermelhada Lactose negativa – coloração inalterada

31 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar MacConkey
Salmonella. E.coli

32 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar MacConkey
Klebsiella sp

33 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Salmonella-Shigella (SS)
Inibem microrganismos Gram positivos (sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio) Tiossulfato de sódio e o citrato férrico Colônias com centro negro (H2S) ou colônias incolores: suspeita de Salmonella. Colônias incolores: suspeita de Shigella spp

34 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Salmonella-Shigella (SS)
Salmonella e Shigella

35 Utilizado para semear amostras de urina
Meios para Crescimento e Isolamento Ágar CLED – cystine lactose electrolyte deficient Utilizado para semear amostras de urina Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras. Cor original do meio: azul claro. Colônias lactose positiva: cor amarela. Colônias lactose negativa: cor azul.

36 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar CLED – cystine lactose electrolyte deficient

37 Meios para Crescimento e Isolamento Löwenstein Jensen
Base formada por ovos integrais Isolamento primário de micobactérias. Cor original do meio: verde claro Positivo: Crescimento de colônias amarelas/vermelhas Negativo: ausência de crescimento .

38 Meios para Crescimento e Isolamento Löwenstein Jensen

39 Identificação e Classificação Ágar Sangue
esverdeado

40 Identificação e Classificação Ágar Sangue
S. aureus - colônias -hemolíticas Gama-hemólise (Enterococcus faecalis) Alpha-hemólise (Streptococcus pneumoniae) Beta-hemólise (Streptococcus pyogenes)

41 Provas de Identificação Ágar DNAse

42 Meios para Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos
Ágar Mueller Hinton Ágar Sangue

43 Sensibilidade aos Antimicrobianos Ágar Mueller Hinton
Kirby e Bauer e pelo CLSI - condições de crescimento das principais bactérias. Avaliação da resistência aos antimicrobianos - métodos de difusão em disco e E-test para enterobactérias, não fermentadores, Staphylococcus, Enterococcus sp.

44 Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos Ágar Mueller Hinton
Sensível a novobiocina S. Saprophyticus Resistente S. epidermidis

45 Resistente e sensível à oxacilina
Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos Ágar Mueller Hinton Resistente e sensível à oxacilina MRSA

46 Resumo dos tipos de meio e quais micro-organismos costumam crescer

47 Meios de cultura para fungos
Ágar Sabouraud (meio sólido) BHI (meio líquido) Semeadura: em superfície Incubação: temperatura de 25 a 30 graus por até 4 semanas.

48 Agar Sabouraud