Cultura de células de Theobroma cacao

Apresentação em tema: "Cultura de células de Theobroma cacao"— Transcrição da apresentação:

1 Cultura de células de Theobroma cacao

2 Meio de cultura adequado
Cultura de Células Meio de cultura adequado Planta Matriz Formação de calos

3 Cultura de células vegetais
Células vegetais podem se desenvolver in vitro com as condições adequadas: Sais Vitaminas pH/Temperatura/Luminosidade Hormônios, Auxinas/Citocininas

4 Cultura de células vegetais
As células dos calos apresentam uma série de peculiaridades: Não possuem cloroplastos e elementos da via da fotossíntese Vacúolo muito reduzido Parede celular delgada Poucos metabólitos secundários Se assemelham com as células meristemáticas

5 Embriogênese Somática
Embrião somático Calos Flor Plântula

6 Porque usar cultura de células?
Modelo para os tecidos in vivo Pode-se produzir em grande quantidade Manipulação genética Geração de vários indivíduos isogênicos

7 Cultura de células e M. perniciosa
Muse, R. B. et al. (1996) Effects of the fungus Crinipellis perniciosa, casual agent of witches’ broom disease, on cell and tissue culture of cocoa (Theobroma cacao L.) Plant Pathology 45,

8 Objetivos Estabelecer um protocolo confiável de cultura de células de Theobroma cacao.

9 Material e Métodos Meio de cultura Sais MS Vitaminas MS: Sacarose
Ác. Nicotínico, Tiamina, mio-inusitol, pirodoxina, glicina Sacarose pH 5,8 Hormônios

10 Meios de cultura Hormônio HC JC ARG PCG 2,4 D 2,0 IAA IBA 1,0 Zeatina
0,05 Cinetina 0,1 0,25 Concentração em mg/L

11 Meios de cultura Hormônio HC JC ARG PCG 2,4 D 2,0 IAA IBA 1,0 Zeatina
Cinetina 0,1 0,05 0,25 Concentração em mg/L

12 Resultados Material vegetal utilizado: Folhas jovens de variedade resistente e normal Hormônios: Resultado: MS1  Eficiente na indução de calos MS2  Não formou calos Variedade normal não formou calos Meio 2,4 D IAA Cinetina MS1 2,0 0,25 MS2 0,1

13 Resultados Material vegetal utilizado: Cotilédones das duas variedades e os calos formados anteriormente Hormônios: Meio 2,4 D Cinetina MS1a 2,0 0,25 MS1b 0,0 MS1c 1,5 MS1d 2,5 Concentração em mg/L

14 Resultados MS1a: Pouco eficiente na indução de calos em cotilédones
MS1b: Muito eficiente, mas induziu a formação de muitas raizes e apresentou alto nível de oxidação MS1c: Induziu a formação de calos, mais discreta que MS1d: Quase não formou calos Não foi possível identificar diferenças entre os meios dos calos já formados com folhas

15 Resultados

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18 Resultados

19 Resultados

20 Resultados

21 Próximos testes Meios usados para cotilédones:
Utilizar caule para a indução de calos Meio 2,4 D Cinetina MS1c 1,5 0,25 MS1e 0,0 MS1f 0,15 Concentração em mg/L

22 Perspectivas Com o protocolo de cultura de células estabelecido:
Transformação de calos Produção de protoplastos