LASER CAPTURE MICRODISSECTION (LCM)

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1 LASER CAPTURE MICRODISSECTION (LCM)

2 Microdissecção a Laser
1996 – National Cancer Institute dos EUA (Emmert-Buck MR et al, 1996) Tornou-se uma ferramenta extremamente importante na pesquisa biológica, potencialmente ampliando o uso de técnicas já existentes de Biologia Molecular. Assim, a área de aplicação desta tecnologia reúne vários grupos como: a Patologia, as Neurociências, a Genética, a Botânica e a Medicina Forense entre outras Leica LMD6000 Laser microdissection system

3 Arcturus - PixCell IIe™ LCM Station
Animação 1

4 Gravidade Lâmina contém um filme transparente termoplástico (ethylene vinyl acetate polymer) Laser de dióxido de carbono Animação2

5 Animação 3 Animação 4

6 Microdissecção a Laser
Extração de populações celulares homogêneas, garantindo que apenas as células de interesse sejam isoladas (células epiteliais, por exemplo) Muito preciso, Sem contato mecânico, As espécies são coletadas com baixo risco de contaminação O contato com o laser preserva a morfologia das células e seu material genético, permitindo análise molecular.

7 Microdissecção a Laser
O material extraído pode ser previamente fixado em parafina (material de arquivo) ou congelado ISOLAR: Grupos de células semelhantes, Estruturas multicelulares Células únicas Cromossomos IDENTIFICAÇÃO DAS CÉLULAS E/OU TECIDO Coloração de rotina HE, AT Imunocitoquímica, Imunofluorescencia DIC (diferencial de contraste de interferencia) TÉCNICAS: Avaliar a expressão gênica (RNA ou DNA), Western blotting Técnicas protêomicas Quantidade de material Extração de RNA, por exemplo de 10 células a células células para análise em gel 2-D células para Western Blot

8 Dificuldades Preservação do material MORFOLOGIA INTEGRIDADE DNA, RNA,
PROTEÍNAS

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10 Citoquímica de lectina DBA
ED  Citoquímica de lectina DBA

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12 http://www.direxlim.fm.usp.br/ Coordenador(es)
Thais Mauad Chin Jia Lin Luiz Fernando Ferraz da Silva