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RESULTADOS AULAS PRÁTICAS UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO CAMPUS DE PIRACICABA Centro de Energia Nuclear na Agricultura Laboratório de Biologia Celular e molecular.

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1 RESULTADOS AULAS PRÁTICAS UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO CAMPUS DE PIRACICABA Centro de Energia Nuclear na Agricultura Laboratório de Biologia Celular e molecular Disciplina CEN-0333 – Análise Diagnóstica de Organismos Geneticamente Modificados (OGMs) Responsável: Dra. Siu Mui Tsai Ap. Técnico: José Elias Gomes Estagiária: Fabiana S. Cannavan

2 06/03/2012 Materiais usados na aula prática para detecção de OGMs KIT TRAIT PARA DETECÇÃO DE PROTEINAS Proteína da Agrobacterium tumefasciens em Soja, Canola e Algodão: CP4 EPSPS (RR)

3 Para a credibilidade do teste, todas as fitas devem apresentar a marca, a linha controle, proveniente da proteína (soja e milho), indicando que houve a correta migração das proteínas do extrato pela fita e ligação com seus respectivos anticorpos; Conforme esperado, os grãos geneticamente modificados com o gene CP4 EPSPS nos seus tecidos, indicaram resultado positivo na avaliação das marcas na fita-teste. Nesses casos, as tiras de fluxo lateral fornecidas no Kit indicaram a formação de duas marcas: a primeira referente á proteína, e a segunda, exclusiva dos transgênicos;

4 Grãos de Soja convencional Grãos de Soja transgênica

5 O teste é qualitativo e capaz de detectar amostras com nível de contaminação acima de 1% em apenas 5 minutos. O seu uso é de extrema praticidade, sendo muito importante para rápida detecção de alimentos geneticamente modificados em portos e aeroportos.

6 Para o uso de técnicas moleculares de detecção de OGMs, a turma foi dividida em grupos Grupo 1 1 – Grãos Soja Convencional 2 – Grãos Soja Convencional 3 – Grãos Soja Convencional 1A – Leite Soja 2A – Proteina Soja Texturizada (Carne Soja ) 1M – Folha Milho Convencional 2M – Folha Milho Transgênica Grupo 2 4 – Grão Soja convencional 5 – Grãos Soja Convencional 6 – Grãos Soja Convencional 3A – Leite Soja 4A – Proteina Soja Texturizada (Carne Soja ) 3M – Folha Milho Convencional 4M – Folha Milho Transgênica

7 Grupo 3Grupo 4 Para o uso de técnicas moleculares de detecção de OGMs, a turma foi dividida em grupos 7 – Grãos Soja Convencional 8 – Grãos Soja Convencional 9 – Grãos Soja Convencional 5A – Leite Soja 6A – Proteina Soja Texturizada (Carne Soja ) 5M – Folha Milho Convencional 6M – Folha Milho Transgênica 10 – Grãos Soja Transgênica 11 – Grãos Soja Transgênica 12 – Grãos Soja Transgênica 7A – Leite Soja 8A – Proteina Soja Texturizada (Carne Soja ) 7M – Folha Milho Convencional 8M – Folha Milho Transgênica

8 Grupo 5Grupo 6 Para o uso de técnicas moleculares de detecção de OGMs, a turma foi dividida em grupos 13 – Grãos Soja Transgênica 14 – Grãos Soja Transgênica 15 – Grãos Soja Transgênica 9A – Leite Soja 10A – Proteina Soja Texturizada (Carne Soja ) 9M – Folha Milho Convencional 10M – Folha Milho Transgênica 16 – Grãos Soja Transgênica 17 – Grãos Soja Transgênica 18 – Grãos Soja Transgênica 11A – Leite Soja 12A – Proteina Soja Texturizada (Carne Soja ) 11M – Folha Milho Convencional 12M – Folha Milho Transgênica

9 13/03/2012 extração do DNA genômico total de grãos de soja – protocolo CTAB de Doyle&Doyle 1990, modificado; 20/03/2012 Extração de DNA utilizando Sistema de Purificação de DNA para Alimento Wizard Magnetic Cat. FF3750 27/03/2012 Extração de DNA de tecidos foliares de milho – protocolo CTAB de Doyle&Doyle 1990, modificado.

10 Quantificação e pureza das amostras de DNA mensuradas em espectrofotômetro (Nanodrop 1100) 10/04/2012 Amostras - Grupo1ng/µl260/280 1821.81.49 21372.21.4 32035.51.36 A1347.51.5 A2366.81.71 1M618.11.96 2M14511.94 Amostras - Grupo2ng/µl260/280 41462.51.23 53235.51.33 63817.51.34 3A367.21.6 4A365.61.89 3M948.61.96 4M523.41.96 Amostras - Grupo3ng/µl260/280 73847.61.33 83970.51.29 91977.51.36 5A4971.65 6A7561.73 5M818.31.96 6M526.81.91 Amostras - Grupo4ng/µl260/280 103761.81.33 11-247.41.18 121048.61.41 7A766.91.71 8A1346.51.79 7M1744.11.96 8M1191.31.97

11 Quantificação e pureza das amostras de DNA mensuradas em espectrofotômetro (Nanodrop 1100) 10/04/2012 Amostras - Grupo5ng/µl260/280 133289.31.29 144381.21.29 152308.41.29 9A722.81.61 10A532.61.76 9M13601.96 10M696.91.97 Amostras - Grupo6ng/µl260/280 163127.41.32 172765.51.3 182873.21.31 11A525.41.58 12A482.81.86 11M1266.91.97 12M642.91.95 12M864.31.5

12 GRUPO 1 10/04/2012 Quantificação do DNA 1231A2A1M2M GRUPO 2 4 5 6 3A 4A 3M 4M

13 GRUPO 3 10/04/2012 Quantificação do DNA 7895A6A5M6M GRUPO 4 1011127A8A7M8M

14 GRUPO 5 10/04/2012 Quantificação do DNA 13 14 15 9A 10A 9M 10M GRUPO 6 16 17 18 11A 12A 11M 12M

15 Grupo 1 1 – Soja 0% 2 – Soja 5% 3 – Grãos de soja convencional 4 – Grãos de soja convencional 5 – Grãos de soja convencional 6 – Leite processado 7 – Carne processada 8 – Folha de milho convencional 9 – Folha de milho transgênico 10 – Controle Negativo PCR - Primer LEC 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

16 Grupo 2 1 – Soja 0% 2 – Soja 5% 3 – Grãos de soja convencional 4 – Grãos de soja convencional 5 – Grãos de soja convencional 6 – Leite processado 7 – Carne processada 8 – Folha de milho convencional 9 – Folha de milho transgênico 10 – Controle Negativo PCR - Primer RR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

17 Grupo 3 1 – Soja 0% 2 – Soja 5% 3 – Grãos de soja convencional 4 – Grãos de soja convencional 5 – Grãos de soja convencional 6 – Leite processado 7 – Carne processada 8 – Folha de milho convencional 9 – Folha de milho transgênico 10 – Controle Negativo PCR - Primer 35S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

18 Grupo 4 1 – Soja 0% 2 – Soja 5% 3 – Grãos de soja transgênica 4 – Grãos de soja transgênica 5 – Grãos de soja transgênica 6 – Leite processado 7 – Carne processada 8 – Folha de milho convencional 9 – Folha de milho transgênico 10 – Controle Negativo PCR - Primer LEC 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

19 Grupo 5 1 – Soja 0% 2 – Soja 5% 3 – Grãos de soja transgênica 4 – Grãos de soja transgênica 5 – Grãos de soja transgênica 6 – Leite processado 7 – Carne processada 8 – Folha de milho convencional 9 – Folha de milho transgênico 10 – Controle Negativo PCR - Primer RR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

20 Grupo 6 1 – Soja 0% 2 – Soja 5% 3 – Grãos de soja transgênica 4 – Grãos de soja transgênica 5 – Grãos de soja transgênica 6 – Leite processado 7 – Carne processada 8 – Folha de milho convencional 9 – Folha de milho transgênico 10 – Controle Negativo PCR - Primer 35S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10


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