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Transcrição do RNA em Organismos Procariotos e Eucariotos Profº: Edmar Vaz de Andrade Monitota: Anita Souza 1-Aspectos Gerais 2-RNA Polimerase DNA Dependente.

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1 Transcrição do RNA em Organismos Procariotos e Eucariotos Profº: Edmar Vaz de Andrade Monitota: Anita Souza 1-Aspectos Gerais 2-RNA Polimerase DNA Dependente 3-Região Promotora 4-Transcrição em E. coli 5-mRNA policistrônico

2 Dogma Central da Biologia Molecular 1-Aspectos Gerais Transcrição Processo pelo qual ocorre a síntese de uma molécula de RNA a partir de uma molécula DNA molde. Replicação Transcrição Tradução proteína

3 1-Aspectos Gerais Tipos de RNAs transcritos –mRNA: codifica a seqüência de aminoácidos de cadeias polipeptídicas. –tRNA: transporta um aminoácido específico durante a síntese protéica. –rRNA: interage com proteínas constituindo os ribossomos (maquinário da síntese protéica). –RNAs reguladores: regulação de diferentes processos celulares

4 Replicação do DNA Direção da síntese: 5-3 Cromossomo inteiro é copiado Requer iniciador (primer) As duas fitas da dupla hélice são copiadas Transcrição do RNA Direção da síntese: 5-3 Segmentos gênicos são copiados Não requer iniciador Somente uma fita serve como molde em um dado momento 1-Aspectos Gerais

5 O RNA é transcrito a partir da fita molde e sua seqüência é idêntica a da fita codificadora (U/T) 2- Aspectos Gerais Fita 5-3: fita codificadora Fita 3-5: fita molde RNA transcrito

6 Modelo esquemático da RNA polimerase de E. coli Subunidade α: Reuni as subunidade e se liga ao DNA Subunidade β e β: Sítio ativo Subunidade ω: Promove a reunião das subunidades, está associada com ao enovelamento e proteção da subunidade β. Subunidade σ: reconhecimento e ligação da região promotora no DNA. 2-RNA Polimerase DNA Dependente

7 Transcrição pela RNA polimerase na Echerichia coli RNA polimerase DNA dependente - Requer ainda os quatro ribonucleosídeos 5-trifosfato e Mg 2+ 2-RNA Polimerase DNA Dependente Fita molde Desanelamento Bolha de transcrição Re-anelamento Direção da transcrição Sítio ativo Fita codificadora RNA polimeras e DNA-RNA híbrido, 8 pb

8 3-Região Promotora

9 Seqüências consenso de promotores de E. coli 3-Região Promotora Região -35 TTGACAN 17 TATAATN6N6 Região a ser transcrita Região -10 (TATA box ou Pribnow box) Espaçadores Sítio de início de transcrição (+1)

10 3-Região Promotora Eficiência da ligação da RNA polimerase ao promotor –Seqüência nucleotídica do promotor –Espaçamento entre as regiões consenso –Distância entre as regiões consenso e o sítio de início de transcrição

11 4-Transcrição em E. coli Etapa de início da transcrição A polimerase se liga à sequência promotora no duplex de DNA. Complexo fechado A polimerase separa o duplex de DNA próximo ao sítio de iniciação da trancrição, formando uma bolha de transcrição. Complexo aberto. A polimerase catalisa a ligação fosfodiéster dos dois rNTPs iniciais. Subunid. σ é liberada Sítio de iniciação sobre a fita molde Sítio de terminação sobre a fita molde Iniciação Bolha de transcrição Promotor Região -10 à +2 ou +3

12 4-Transcrição em E. coli Etapa de elongação da transcrição Não possui atividade revisora 3 5 Taxa de erro 10 4 e 10 5 A síntese do RNA é processiva Regiões ricas em G-C diminuem a velocidade da RNAP Elongação A polimerase avança sobre a fita inferior 3 5, separando o duplex de DNA e adicionando rNTPs ao RNA em crescimento RNA nascente Região híbrida DNA-RNA

13 4-Transcrição em E. coli Etapa de término da transcrição Terminação No sítio de terminação da transcrição, a polimerase libera o RNA completo e se dissocia do DNA Fita completa de RNA Terminação Rho-dependente: proteína Rho desestabiliza a ligação da RNAP e o DNA Terminação Rho-independente: formação de um grampo de RNA

14 4-Transcrição em E. coli Terminação Rho-independente

15 5-mRNA policistrônico Decodificação de vários genes a partir de um único mRNA Sítio de iniciação da síntese do mRNA trp Sítio de iniciação de síntese de proteínas Genoma de E. coli Procariotos Operon trp Transcrição Tradução mRNA trp Proteínas

16 1-Aspectos gerais RNA polimerase I –Transcrição de rRNA RNA polimerase II –Transcrição de mRNA RNA polimerase III –Transcrição de tRNA, rRNA e RNAs reguladores Tipos de RNA polimerase em eucariotos

17 Processamento do pré-mRNA eucarioto mRNA monocistrônico


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