CÉLULAS ANIMAIS Ivanise C.S.Mota
CÉLULAS ANIMAIS
- Raspado de mucosa bucal. - Swab. - Recipiente contendo sacarose a 3%. - Tubos de ensaio. - Suporte para tubos de ensaio. - Recipiente para banho de gelo. - Papel alumínio. - Reagentes: # Etanol a 95%, detergente incolor, água destilada, cloreto de sódio.
Higienizar a boca, fazendo bochechos com água. Raspar mucosa com auxílio de um swab (nos dois lados bucais). Em um recipiente, colocar uma porção de solução de sacarose a 3% e, logo em seguida, bochechar esta solução por 2 minutos. Recolher o volume obtido do bochecho e colocar no recipiente anterior, mergulhando o swab usado na raspagem. Transferir 5,0ml do volume anterior para um tubo de ensaio e adicionar 01 pitada de cloreto de sódio, homogeinizando o material com auxílio de papel alumínio. Adicional 500µl de detergente neutro a 25% e homogeinizar vagarosamente. Incubar em banho-maria a 55ºC por 10 minutos. Resfriar em banho de gelo, por 10 minutos aproximadamente. Colocar no tubo de ensaio, delicadamente, 5,0ml de álcool etílico gelado a 95% e observar.
A proteinase K é indispensável no material sanguíneo devido digerir proteínas e eliminar a contaminação das preparações de ácido nucleico, além de inativar as nucleases que poderiam degradar o DNA ou o RNA durante a purificação.
Para que o uso do detergente? Para que o uso do sal? Por que o uso de álcool gelado? Qual a função da proteinase K? Porque avaliar leucócitos e desprezar os eritrócitos? Pode ser avaliado somente células vivas? Justifique sua resposta.