MONOGRAFIA: EFEITO DA OUABAÍNA NA RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS EM JUNÇÃO NEUROMUSCULAR Aluna: Luciana Ferreira Leite Orientadora: Profª. Dra. Cristina Guatimosim Fonseca Laboratório de Biologia da Neurotransmissão

JUNÇÃO NEUROMUSCULAR DE RÃ http://academic.wsc.edu/faculty/jatodd1/351/ch6outline.html

RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS Abreu, B.J.

RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS http://www.standford.edu/group/Urchin/GIFS/exocyt.gif http://thalamus.wustl.edu/nonetlab/ResearchF/svcycle.html

RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS http://www.neuro.ki.se/molsyn/Brodin_home.html http://www.erin.utoronto.ca/~w3bio315/RME.htm

RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS Royle and Lagnado, 2003

FM1-43 STAINING + Positive head bridges Lypophilic tail Abreu, B.J.

FM1-43 STAINING Marcação com estímulo elétrico de 20Hz por 10 min

FM1-43 STAINING Marcação com estímulo elétrico de 20Hz por 10 min

FM1-43 DESTAINING Abreu, B.J.

COMPOSTOS QUE AFETAM A RECICLAGEM α-Latrotoxina (Ceccarelli & Hurlbut, 1980; Henkel & Betz,1995)

COMPOSTOS QUE AFETAM A RECICLAGEM α-Latrotoxina (Ceccarelli & Hurlbut, 1980; Henkel & Betz,1995) Propionato e Acidificação (Lindgren et al, 1996)

COMPOSTOS QUE AFETAM A RECICLAGEM α-Latrotoxina (Ceccarelli & Hurlbut, 1980; Henkel & Betz,1995) Propionato e Acidificação (Lindgren et al, 1996) OUABAÍNA (Adam-Vizi & Ligeti, 1984; Haimann et al, 1985; Prado et al, 1990; Prado et al, 1993; Lomeo et al, 2003).

OBJETIVOS Objetivo geral Investigar o efeito da ouabaína na reciclagem de vesículas sinápticas “ in vivo”

OBJETIVOS Objetivos específicos - Padronizar a técnica de marcação de terminais axônicos com a sonda fluorescente FM1-43. - Investigar o efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas. - Investigar o efeito da ouabaína na endocitose de vesículas sinápticas. - Investigar se a ação da ouabaína é dependente de cálcio extracelular.

Marcação e desmarcação dos terminais nervosos com estímulo elétrico RESULTADOS Marcação e desmarcação dos terminais nervosos com estímulo elétrico A B C 1 terminação / 6 spots

Efeito da ouabaína na marcação de terminais nervosos RESULTADOS Efeito da ouabaína na marcação de terminais nervosos Ouabaína Estímulo elétrico

Efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas RESULTADOS Efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas 34 spots 6 terminações

RESULTADOS O efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas é dependente de cálcio extracelular? 68 spots 12 terminações

RESULTADOS Efeitos da ouabaína:

RESULTADOS Efeitos da ouabaína: Bloqueia a endocitose

RESULTADOS Efeitos da ouabaína: Bloqueia a endocitose Promove a exocitose

RESULTADOS Efeitos da ouabaína: Bloqueia a endocitose Promove a exocitose O efeito da ouabaína é independente de cálcio extracelular

PERSPECTIVAS...

AGRADECIMENTOS ...

OBRIGADA PELA ATENÇÃO!