Y. Saitoh AND U.K. Laemmli Apresentação: D. Safe AND J.L. Carvalho Cold Spring Harbor Symposia on Quantititive Biology Vol 83, 1993 From the Chromosomal Loops and the Scaffold to the Classic Bands of Metaphase Chromosomes Y. Saitoh AND U.K. Laemmli Apresentação: D. Safe AND J.L. Carvalho

. Dificuldades de estudo . Estrutura dos cromossomos nativos: Loops Cromossômicos . Dificuldades de estudo . Estrutura dos cromossomos nativos:

Loops Cromossômicos Conceito sólido Primeiras bruxarias . Microscopia eletrônica de cromossomos metafásicos que tiveram suas histonas removidas através de tratamento com tampões . Secções dos cromossomos . Técnicas de espalhamento . Imunofluorescência (anticorpos anti Topo II)

Loops Cromossômicos Cromossomos desdobrados Halo (loops) Scaffold

Loops Cromossômicos Scaffold = bases dos loops em cromossomos desdobrados (região heterocromática) Características do scaffold

Topoisomerase II e SARs Proteína SC1 (localização, ligação às SARs e função) SARs = Scaffold-associated regions (função e características) - A tracts - Alterações na estrutura do cromossomo

Bandas Cromossômicas Bandas Q

Bandas Cromossômicas Modelo clássico: discos empilhados, densidade gênica, tempo de replicação, seqüências repetitivas, conformação da cromatina. Tipos: C, Q/G e R

Bandas Cromossômicas Hipóteses para o bandeamento - Acessibilidade do corante - Riqueza - Superestrutura (?)

Bandas Cromossômicas Bandas Q/G - Mais heterocromática - “Rica” em AT - 20% dos genes

Bandas Cromossômicas Bandas R - Replica primeiro - “Rica” em GC - Digerida por tripsina - Genes housekeeping

Modelo Loop/Scaffold de cromossomos nativos Dois tipos de loops: Q/G e R Fila AT Estrutura do cromossomo compacto

Modelo Loop/Scaffold de cromossomos nativos

Empacotamento dos loops cromossômicos: possibilidades e ferramentas. Polaridades bioquímica e morfológica

Detecção da Base e Corpo dos Loops Soro específico Fluorocromos AT-específicos

Daunomicina e a detecção das bases dos loops DNA muito rico em AT (>65%) Fluorometria: - Excesso de poli (dA.dT), (dA).(dT) ou (dI).(dC): sinal residual de 45-55% - Excesso de poli (dC.dG), (dC).(dG): sinal residual de 1-2% - Excesso de SAR (74% AT): sinal residual de 10-15%

YOYO e a detecção do corpo dos loops Cora tanto a base quanto o corpo MG interage com fragmentos de DNA ricos em AT

Bandas Q e R são complementares e formadas por enovelamento diferencial da fila AT

Bandas Q e R são complementares e formadas por enovelamento diferencial da fila AT Densidade de DNA e acessibilidade do corante. Complementaridade entre as bandas Q e R Aparência “puff-like” das bandas R Uso de corantes consecutivamente no mesmo cromossomo

Bandas Q e R são complementares e formadas por enovelamento diferencial da fila AT

Complementaridade de Sub-bandas Bandas Q com estrutura preservada não são coradas igualmente por daunomicina

Complementaridade de Sub-bandas

Complementaridade de Sub-bandas

Evidências Relacionam a Fila AT ao Scaffold Fila AT como sinal óptico gerado pelo complexo scaffold/SARs Daunomicina e SARs Topoisomerase II, HMG-I(Y) e a fila AT

Evidências Relacionam a Fila AT ao Scaffold Dauno Topo II

Sub-bandas Giemsa e o Scaffold Cromossomos alongados pré-matafásicos Relaçao 1x1 entre sub-bandas giemsa e AT-coils