 Ca 2+ ATPase :”Thus, heat would be derived from the continuous synthesis and hydrolysis of ATP in the mitochondria matrix.” de Meis, L et al., JBC

 UCP : uncoupler protein. Presente em diversos eucariotos. Cannon, B., and Nedergaard, J. (2004) Physiol. Rev.

 Mecanismo de produção de calor pela UCP : “These types of suggested mechanisms… consequently to stimulation of substrate oxidation/oxygen consumption in the mitochondria (i.e., thermogenesis).” Cannon, B., and Nedergaard, J. (2004) Physiol. Rev.

 Comprovar o mecanismo de produção de calor da UCP por aumento de oxidação de substratos e consumo de oxigênio e comparar com outros ativadores do aumento de metabolismo.

 Isolamento mitocondrial de BAT, tubérculos de batata e cérebro de camundongos: centrifugação diferencial em gradiente de percoll.  Consumo de oxigênio: oxigrafia de alta resolução (oroboros) 1- Mitocôndrias na presença de diferentes concentrações de ácido graxo ( ex: ác. linolênico), ativadas por diferentes substratos da CTE ( succinato, piruvato malato). (estado desacoplado) 2- Mitocôndrias na presença de 1mg/mLBSA faf ( quelante de ácidos graxos) e 2mM GDP. (estado acoplado)

 Calorimetria: calorímetro do prof Leopoldo. 1- Mitocôndrias na presença de diferentes concentrações de ácido graxo ( ex: ác. linolênico), ativadas por diferentes substratos da CTE ( succinato,piruvato malato). (estado desacoplado) 2- Mitocôndrias na presença de 1mg/mLBSA faf ( quelante de ácidos graxos) e 2mM GDP. (estado acoplado) Comparação do calor gerado com diferentes substratos da cadeia transportadora de elétrons Investigar o calor gerado pelo aumento do metabolismo

 Investigar o calor gerado pelo aumento do metabolismo

 Hexokinase mitocondrial : da- Silva, WS et al, JBC Camacho-Pereira et al, Plant. Phisiol

 Se a UCP produz calor por aumentar a oxidação de substratos e o consumo de oxigênio, a hexokinase mitocondrial que também aumenta o consumo de oxigênio nos mesmos níveis da UCP, seria um potencial gerador de calor.  Investigar a produção de calor por atividade de hexokinase mitocondrial em mitocondrias isoladas de tubérculos de batata e cérebro de ratos.

 Calorimetria: calorímetro do prof Leopoldo. 1- Mitocôndrias na presença de diferentes concentrações de glicose (batatas) e 2-DOG (para cérebro) na presença de BSA fatty acid free e GDP. 2- Testar o número 1 com diferentes substratos da cadeia transportadora de elétrons.  Ainda não foi verificado a presença de atividade de hexokinase em mitocôndrias isoladas de BAT.

 Qualquer sistema que aumente o metabolismo, principalmente o consumo de oxigênio, seria capaz de produzir calor e participaria do processo de termogênese.