Blade Runner: Envelhecimento Precoce

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1 Blade Runner: Envelhecimento Precoce
Eduardo Lipparelli Fernandez Fabiana Fernandes Bressan Paula Thiemi Kawamoto Balieiro

2 Produção de indivíduos geneticamente idênticos
Definição Clone: Produção de indivíduos geneticamente idênticos

3 gêmeos

4 Histórico 1952 – transferência nuclear em anfíbios (Briges & King)
1981 – transferência nuclear em camundongo (Illmensce & Hope) 1989 – embriões de cordeiro de 8 células (Willadsen)

5 Células adultas

6 Dolly 1997 – Wilmut et al

7 Suíno Polejaeva et al.

8 Caprino Cheng et al (transgênico)

9 Copy Cat 2002 – Shin, et al

10 Técnicas de Tecnologia de Transferência Nuclear
Produção de embriões por transferência nuclear Técnicas baseadas nos descritos de Willadsen (1986) Maturação, enucleação e ativação do oócito receptor Preparação das células doadoras de núcleos Reconstrução dos embriões

11 Técnicas de Tecnologia de Transferência Nuclear
Maturação Oócitos receptores em estágio de metáfase II In vivo In vitro Oócitos em prófase I em período de cultura

12 Técnicas de Tecnologia de Transferência Nuclear
Maturação Enucleação Oócitos separados das células do cumulus Ponto de referência – corpúsculo polar Remoção de 30% do citoplasma adjacente ao 1º corpúsculo polar Marcadores são utilizados para visualização da cromatina – problemas Outras técnicas – após ativação a enucleação

13 Técnicas de Tecnologia de Transferência Nuclear
Maturação Enucleação Ativação Bloqueio da meiose em metáfase II feito por complexos de proteínas denominados MPF Espermatozóide – ativação do oócito (irradiação) Oscilações de cálcio – baixa eficiência em oócitos não envelhecidos Inibição da fosforilação ou síntese protéica

14 Técnicas de Tecnologia de Transferência Nuclear
Preparação das células doadoras de núcleos Células embrionárias (diferença entre espécies) Desagregação dos blastômeros Retirada da zona pelúcida Aspiradas por pipetas Injetadas no espaço perivitelino em íntimo contato com a membrana plasmática de oócitos receptores

15 Técnicas de Tecnologia de Transferência Nuclear
Reconstrução dos embriões Fusão das membranas plasmáticas da cél. doadora com os oócitos receptores Descargas elétricas Vírus Sendai inativado Polietilenoglicol Lipossomas

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18 Utilizações da clonagem
Clonagem reprodutiva Preservação de espécies Pesquisas biomédicas Testes do sistema imune Animais trasgênicos Clonagem terapêutica

19 Viabilidade Mortalidade embrionária – placenta Wells, 1999
Hill et. al., 1999 Peso ao nascer (LCS) Clonagem (Wilson et. al. 1995) e FIV

20 Viabilidade Problemas respiratórios (adrenal?) Deficiência imunológica
Renard et. al., 1999 Envelhecimento precoce – será???

21 Envelhecimento precoce
Mecanismo de reparo do DNA

22 Wilmut et al., 1997 X Lanza et al., 2000

23 Blade Runner: ética X ciência