Proteínas Recombinantes

Apresentação em tema: "Proteínas Recombinantes"— Transcrição da apresentação:

1 Proteínas Recombinantes
Histórico e vantagens

2 Origem 1944 - Oswald Avery: transmissão de informações pelo DNA.
François Jacob e Jacques Monod: síntese proteica apartir do DNA. 1972- Paul Berg: Ligação de cadeias genéticas de animais organismos diferentes. Werner Arber, Daniel Nathans e Hamilton Smith: Enzimas de restrição (Nobel)

3 Sistemas de Expressão

4 Sistemas de Expressão Desvantagem: Produz muitas proteases!!

5 Sistemas de Expressão

6 Sistemas de Expressão

7 Sistemas de Expressão

8 Impacto das P.Rs no desenvolvimento de vacinas
17 vacinas em 137 anos. 31 vacinas em 40 anos

9

10 Objetivo: Estabelecer uma abordagem eficiente frente a proteínas de difícil expressão utilizando E.coli. Para estabelecer uma estratégia 71 proteínas foram escolhidas e cada uma expressa em 15 formas diferentes: (cepa x temperatura x plasmídeos x estresse)

11 Cepas de E.coli BL21-Gold: deficiente em EndA1 nuclease
BL21-Codon plus: obtida da BL21 Gold, apresenta mais copias de genes que codificam tRNAs. BL21-V2R1: Derivadas de cepas BL21 deficientes em lon (deficiente em proteases dependentes de ATP) de e omT (deficiente em proteases de membrana). BL21-V2R1 pRARE2: introdução do plasmídeo pRARE2 que fornece tRNAs. BL21-Rosetta: códons raros, deficiente em protease e resistente a cloranfenicol. ArcticExpress: contém chaperonas que auxiliam no folding e possibilitam o funcionamento metabólico de 4° a 12°C. JM109: mutações em EndA1 e RecA1, indicado para clonagem de plasmídeos. W3110: mutação no gene gatA que responsável pela metabolização do C.

12 Plasmídeos 6 His-tags introduzidas em C-terminal ou N-terminal.

13 Purificação Os lisados e sobrenadantes são incubados com beads NI-NTA.
A avaliação da expressão é feita por SDS-PAGE.

14

15

16

17

18

19

20

21