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Introdução ao delineamento experimental
Prof. Dr. Vinicius Campos Disciplina de Bioestatística e Delineamento Experimental Graduação em Biotecnologia - UFPel
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Abordagens da aula... 1. O Que são experimentos e para que servem
2. Planejamento de experimentos 3. Execução de experimentos 4. Análise e interpretação dos resultados
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Um experimento é um teste feito para validar uma hipótese
O que é um experimento? Um experimento é um teste feito para validar uma hipótese A experimentação razão pela qual nós estamos onde estamos
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O que um experimento propicia para o pesquisador
Reflita e estude sobre o experimento Publique os resultados Seja critico com seus dados Boa reputação
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Planejamento do experimento
Um experimento é igual à um crime Nunca será perfeito
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Planejamento do experimento
Mas como driblamos este problema? Definindo objetivos específicos
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Planejamento do experimento
Defina a pergunta Esboce o experimento Variáveis experimentais Controles Número de amostras e repetições do exp. Estatística Organize o experimento Realize o experimento Colete e analise os dados
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Erros comuns no planejamento
Não pensar sobre a necessidade do exp. Planejar experimentos grandes Esquecer dos controles Não verificar se todos os reagentes estão disponíveis Não verificar se a estrutura do laboratório é suficiente para a execução do experimento Não saber como é feita a coleta e análise dos dados
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Referencial teórico Buscar leitura sobre experimentos semelhantes/metodologias Buscar protocolos Entrar em contato com pesquisadores Ler poucos artigos no início Artigos em português e depois em inglês Buscar artigos sobre o tema uma vez por semana
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Referencial teórico
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Referencial teórico
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Referencial teórico
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Controles Controles experimentais Controles de tratamento
Marcador de peso molecular de DNA Controles de tratamento Positivos ou negativos Controles positivos - soro sabidamente contaminado Controles negativos soro sabidamente não-contaminado
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Controles Intervalos de tempo
Expressão gênica em 0, 2, 4, 8, 16 h após o tratamento com IGF-1 em células tumorais em cultivo
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Se tiver que excluir outros controles desista do experimento!!!
O que fazer se não der para fazer os controles? Alguns controles podem ser excluídos nesta ordem: Controles de procedimento Duplicatas de controles experimentais Se tiver que excluir outros controles desista do experimento!!!
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Execução do experimento
Cuidados com as normas de cada técnica Rigidez na repetibilidade Use protocolos estabelecidos
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Execução do experimento - protocolos
Obtenha o protocolo Leia o protocolo e veja se ele faz sentido Prepare os reagentes listados no protocolo, verifique e reserve os equipamentos necessários Siga o protocolo exatamente na primeira vez Modifique o protocolo baseado na sua experiência com ele
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Protocolos
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Coleta e análise dos dados
Coleta dos dados Saiba que tipo de resultado você está coletando!!! Exemplo: Avaliação da produção de ROS em oócitos maturados in vitro Técnica: coloração dos oócitos com 2', 7'- diacetato de diclorofluoresceína – corante fluorescente Resultado: ????
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2', 7'- diacetato de diclorofluoresceína
Oócitos corados com 2', 7'- diacetato de diclorofluoresceína
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Intensidade de fluorescência dos oócitos corados
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Análise dos dados Estatística Comparação dos dados
Cálculos para testar se a diferença entre os dados é devida ao tratamento ou é meramente ao acaso Identificar previamente que teste estatístico será usado para comparar o tipo de dados que será obtido Usar softwares estatísticos
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Apresentação dos dados
Os dados deverão ser resumidos e organizados para apresentação e futura publicação Em tabelas – quando é importante a apresentação dos valores Em gráficos – apresentação distribuições, tendências ou relacionamento entre variáveis
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Intensidade de fluorescência dos oócitos corados
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Interpretação de resultados
O experimento funcionou? – controles Quais são os resultados? - análise O que o experimento significa? - discussão Outros investigadores vão entender o experimento? - pergunte O resultado pode ser repetido? – faça novamente
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O experimento NÃO funciona!!!
Checar os equipamentos Checar os reagentes Refaça parte do experimento Refaça todo o experimento Pense em trocar de experimento Geralmente as idéias precedem a tecnologia disponivel
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O experimento funciona!!!
Escreva e publique os resultados imediatamente!!! Deposite uma patente de invenção!!!
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Prof. Dr. Vinicius Farias Campos
Graduação em Biotecnologia
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